Gene cloning by site-specific recombination

목차

1. Introduction
2. Materials
3. Method
4. Result
5. Discussion

본문내용

1. Introduction
- recombination
교차에 의해 염색체 또는 염색체부분에서 새롭게 이어 바꾸는 구조가 생성되는 과정이다. 그 결과는 단순히 유전자의 새로운 집합이나 구조가 생기는 것뿐만 아니라 염색체의 증식과 안정성, 수복, 대사, 대사조절, 유전자의 정보발현과 그 조절 등 생물학적으로는 기본적으로 중요한 현상에 밀접하게 관계한다.
제한효소와 DNA ligase를 이용해 재조합하는 방법도 있지만 background가 많이 생겨서 noise가 많아 효율이 높지 않다. site-specific recombination을 이용하는데 이 방법은 noise가 줄어들어 효율이 높다.

- transformation(형질전환)
외부로부터 주어진 DNA에 의하여 생물의 유전학적 성질이 변하는 것을 의미한다. 염화칼슘을 처리하고 heat shock을 주어 외부 물질(plasmid)을 cell에 넣어주는 화학적 방법과 고전압에서 짧은 시간에 전기 shock을 주어 cell membrane에 구멍을 뚫어 cell안으로 물질을 이동시키는 화학적 방법이 있다.

- insert
recombination에 의한 transformation이 이루어졌는지를 확인하기 위해 선별 marker를 사용한다. 이 실험에서는 cell에 ccdB를 주입하고 이 ccdB에 대한 항생제를 선별marker로 이용하기로 했다. ccdB는 E.coli에서 발현되면 DNA gyrase활성이 억제되어 DNA negative supercoil을 만들지 못해 결국 대장균이 살 수 없게 된다. 이 때, 대장균을 죽이지 못하도록 해독 작용하는 gene의 유무에 따라 cell이 살 수 있는지 없는지가 결정되어 transformation을 확인할 수 있다.

<중 략>

유전자의 기능을 분석하는 과정에는 해당 유전자를 vector에 cloning하고, 목적에 따라 단백질 산물 확보, mRNA 확보, two-hybrid용으로의 전환, reporter유전자와의 fusion gene 제작 등의 추가적인 변형이 필요하며 기본적으로 변형 단계마다 recombinant DNA technology를 사용하게 된다.

참고자료

· 없음