생리학실험, 마우스 뉴런세포배양, IHC 실험 보고서

소개

생리학 실험- 마우스 뉴런 세포배양 및 IHC 실험 보고서입니다
평가 결과 만점 받은 보고서입니다
많은 참고 바랍니다

목차

1. 실험제목
2. 실험목적
3. 실험 재료 및 방법
4. 실험 이론
5. 실험 결과
6. 고찰
7. 참고문헌

본문내용

이번 실험에서는 pregnant mouse로부터 태아를 꺼내어 태아의 머리에서 대뇌를 분리해내고 pipetting으로 분쇄하여 얻은 dissociated mouse cortical neuron들을 primary culture하고, ara-C를 포함한 배지로 미디어 체인지를 한 후, Immunohistochemical staining을 한 시료를 fluorescence microscope로 관찰하였다.

먼저 Mouse neuronal primary culture을 하였다. pregnant mouse(at embryonic day 15)를 경추 탈골 시킨 후 가죽을 잡아당긴 상태에서 잘라 태아를 꺼내어 HBSS가 들어있는 petri dish에 넣었다. 차가울 때 tension이 있어 해부하기 좋기 때문에 dish는 ice위에 올려 둔다.이때 HBSS(Hank’s Balanced Salt Solution)는 saline solution로 세포 내 osmotic pressure와 pH를 유지시키기 위해 사용된다. 그리고 60∮, 35∮ dish에 각각 3ml, 2ml의 serum free media를 넣어두었다. serum은 혈청인데 혈청이 들어있지 않은 미디어를 사용하는 이유는 cortical neuron들이 혈청에 의해 오염되는 것을 막기 위해서이다. 앞서 적출한 태아를 가져다가 머리를 핀셋으로 집어 자르고 dish에 옮겨 머리를 위에서 바라 볼 수 있도록 세워 놓았다. 머리를 위에서 바라볼 수 있게 세워 놓는 이유는 노란 대뇌의 모양을 깔끔하게 볼 수 있기 때문이며, 대뇌를 꺼낼 때 이 상태에서 대뇌를 계속 보면서 대뇌를 감싸고 있는 두개골과 두피를 벗겨내야 대뇌가 어디에 위치하는지 인지하면서 꺼낼 수 있기 때문이다. 옷을 잡아 당기 듯 두개골과 두피를 핀셋으로 들어 올리는 방식으로 대뇌를 제외한 나머지를 벗겨내고 대뇌를 뒤집어 놓았다.

참고자료

· 1) Eric P. Widmaier, Hershel Raff, and Kevin T. Strang, Vander’s Human Physiology, McGrawHill, 2009, p.286~287.
· 2) Reece, Urry, Cain, Wasserman, Minorsky, and Jackson, Campbell Biology, Pearson, 2012, p.1103~1112.
· 3) “면역형광법”, 『생명과학대사전』, 한국생물과학협회.
· 4) Peter Parham, 면역학, 라이프 사이언스, 2005, p.20~25, 40~41.