생리학실험, Immuno-histochemistry(IHC) 실험 보고서

소개

생리학실험인 Immuno-histochemistry(IHC) 실험 보고서입니다.
많은 참고 바랍니다

목차

1. 실험제목
2. 실험목적
3. 실험 재료 및 방법
4. 실험 이론
5. 실험 결과
6. 고찰
7. 참고문헌

본문내용

이번 실험은 Immuno-histochemistry 과정 중 H&E staining을 통하여 cell들의 morphology와 구조를 관찰하여 cancer cell임을 판별하는 실험이었다.
IHC는 세포 내 조직의 단면을 antigen에 특이적으로 결합하는 antibody들을 이용하여 검출하는 과정을 말한다. IHC는 암성 종양에서 발견되는 바와 같이 비정상 세포의 진단에 널리 사용된다. Specific molecular markers는 세포 증식 또는 세포사멸과 같은 cellular events의 특성을 파악하는데 이용된다.항원항체 반응을 가시화는 방법에는 여러 가지가 있는데, 보통 antibody들은 colour-producing reaction을 catalyse할 수 있는 peroxidase와 같은 enzyme에 연결된다. 또한 antibody들은 fluorescein or rhodamine와 같은 fluorophore에 tag될 수 있다. 이에 대하여 설명해보자면 다음과 같다. antibody detection 과정에는 막에 고정된 단백질들에 항체를 결합하여 검출하는 방법은 직접 검출 (direct detection)과 간접 검출 (indirect detection)이 있다. 직접 검출하는 방법은 alkaline phosphatase (AP) 나 horse radish peroxidase (HRP) 를 반응시키는 항체에 결합시켜 사용하는 방법으로 background를 감소시킬 수 있고, 빠르다. 그러나 감도 (sensitivity) 가 떨어지고, 무엇보다 사용 전에 효소를 항체에 표지해야 하고 표지된 항원을 분리해야 하는 번거로움이 있다. 간접 검출 방법은 반응시키는 항체는 직접 효소를 표지하지 않고 항원과 결합한 항체와 결합하는 효소가 결합된 이차 항체를 이용하는 방법이다. 특수한 경우를 제외하고 면역 발색법은 대부분 간접 검출 방법을 이용한다. 1차 항체로는 target protein이 되고, 2차 항체는 HRP conjugated Goat anti-Rabbit IgG antibody 등이 사용된다.

참고자료

· Reece, Urry, Cain, Wasserman, Minorsky, and Jackson, Campbell Biology, Pearson, 2012.
· Luiz Carlos Junqueira, Jos´e Carneiro, Basic Histology, 2006.
· Wikipedia, “Paraformaldehyde”, <3) http://en.wikipedia.org/wiki/Paraformaldehyde3) >
· Wikipedia, “Eosin Y”, <4) http://en.wikipedia.org/wiki/Eosin_Y4) >
· Wikipedia, “IHC”, <5) http://en.wikipedia.org/wiki/Immunohistochemistry5) >
· IHC World, “IHC protocols”, <http://www.ihcworld.com/>