생화학실험, Immunostaining 실험 보고서

소개

생화학실험 Immunostaining 실험 보고서 입니다.
평가 결과 만점 받은 실험 보고서 입니다.

목차

1. 실험제목
2. 실험 목적
3. 실험 결과
4. 고찰 (실험이론 포함)
5. 참고문헌

본문내용

이번 실험은 항원에 항체를 부착하고 부착된 항체에 형광염료를 표지 하는 direct immunostaining 방법으로 시료를 관찰하였다.
보통 Immunostaining은 세포 안에서 단백질의 위치를 보는 데 사용되는데, 우리는 F-actin을 표지하여 관찰하는 데 사용하였다. Myoblasts와 Myotubes 시료 각각에 Rhodamine-phalloidin을 처리하여 필라멘트 구조를 관찰하였고, Hoechst33258을 처리하여 핵을 표지 하여서 관찰한 것이 cell인지 background인지 확인하였다.

<중 략>

항원(antigen)은 면역계를 자극하여 생체에 특이적 면역반응을 유도하는 물질이다. 항원물질의 종류는 대단히 다양하며 면역글로불린이나 T세포 수용체에 의해 인지되고 결합되는 대부분의 분자들, 바이러스 입자 또는 세포를 항원이라고 한다. 단백질, 다당질, 핵산, 지질 및 이들의 복합체 등을 천연항원이라 한다. 또한 화학적으로 합성된 물질이라도 단백질 등과 결합하면 면역계를 자극시킬 수 있다. 분자의 크기는 여러 가지인데 아미노산 여러 개의 펩티드사슬로부터 분자량이 수십만의 물질까지, 또 바이러스, 세균, 동물세포 등도 항원이 될 수 있다. 면역계가 인식하는 구조는 분자에 국재하는 작은 화학구조인데, 항원결정기라고 한다.

<중 략>

Immunostaining은 antibody-based method로 항체와 형광물질을 사용하여 체액과 조직 등에 존재하는 항원을 검출하는 방법이다. Immunostaining에는 직접법과 간접법이 있다. 직접법은 형광항체와 항원 또는 형광항원과 항체와의 결합에 의한 것인데 반해, 간접법은 항원에 대한 항체를 우선 결합시킨 후에 항체에 대한 형광항체를 결합시킨다. 간접법은 직접법에 비해 형광량이 증대되어 검출감도도 좋고 응용범위도 넓다. 이 실험에서 우리는 직접법을 사용하여 C2 cell의 f-actin과 핵을 항체로 표지하고 표지 된 항체에 형광염료를 처리하여 형광현미경으로 관찰하였다.

참고자료

· Eric P. Widmaier, Hershel Raff, and Kevin T. Strang, Vander’s Human Physiology, McGrawHill, 2009, p.286~287.
· Reece, Urry, Cain, Wasserman, Minorsky, and Jackson, Campbell Biology, Pearson, 2012, p.1103~1112.
· “면역형광법”, 『생명과학대사전』, 한국생물과학협회.
· Wikipedia, “Hoechst stain”,
· http://en.wikipedia.org/wiki/Myogenesis>
· Life technologies, “Rhodamine Phalloidin”,
· http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/product/R415>
· Wikipedia, “epitope”, http://en.wikipedia.org/wiki/Epitope
· Peter Parham, 면역학, 라이프 사이언스, 2005, p.20~25, 40~41.