미생물결과

목차

1. 실험방법
(1) Plasmid isolation and Purification
(2) Agarose Gel Electrophoresis

2. 이론
1) DNA란 (구조와 기능)
2) Plasmid란 (특징 및 기능)
3) 항생제를 왜 사용하나?
4) 세포파괴 (cell lysis) 방법 (종류)

3. 실험결과

4. 논의 및 고찰

본문내용

. 실험방법
(1) Plasmid isolation and Purification
① Harvest cell from o/n culture[18:30~18:30]
- 배지의 대장균을 추출해서 튜브에 넣는다.② Centrifuge, 4℃, 13,000rpm, 3min
- 원심분리기[4℃, 13,000rpm, 3min]를 사용해서 분리한다.③ Discard supernatant
- 분리된 것의 액체 층을 버린다.④ Add 100L Sol 1 → vortex well (make sure no clumps)
- 솔루션 1을 넣고 vortex 시켜서 덩어리를 없앤다.⑤ Add 150L Sol 2 → inverting (check clarity)
- 솔루션 2를 넣고 손으로 흔들어 준다. vortex 시키면 플라스미드가 파괴된다.⑥ Add 150L Sol 3 → inverting
- 솔루션 3을 넣고 손으로 흔들어 준다. 살살 흔들어 준다.⑦ Centrifuge, 4℃, 13,000rpm, 3min
- 원심분리기[4℃, 13,000rpm, 3min]를 사용해서 분리한다.⑧ Transfer supernatant to a new tube
- 새로운 튜브에 덩어리를 제외한 우리가 필요한 맑은 용액을 옮긴다.⑨ Add 800L ethanol
- 에반올은 넣어준다. DNA를 침전시켜준다.⑩ Centrifuge, 4℃, 13,000rpm, 3min
- 원심분리기[4℃, 13,000rpm, 3min]를 사용해서 분리한다.⑪ Discard supernatant
- 분리된 것의 액체 층을 버린다. DNA가 약간 흰색으로 보인다.(불순물 포함)⑫ Dry pellet - 건조시킨다.⑬ Add 20L → vortex
- 물을 넣어서 녹인다. DNA가 가진 전하로 인해서 물에 잘 녹는다.⑭ Add loading buffer 5L into 20L of DNA solution : ready for electrophoresis
- loading buffer를 DNA solution에 넣어준다.

참고자료

· 없음