아주대학교 생화학실험 DEAE 이온 교환 크로마토그래피 (이온교환수지법)

소개

아주대학교 생화학실험 DEAE 이온 교환 크로마토그래피를 통해 알부민을 정제하고 resin column의 원리를 알아본 실험 보고서 입니다.

목차

1. 실험제목

2. 실험목적

3. 결과 및 토의
1) 7 개의 test tube에서의 A280을 값을 표시하고, 막대 그래프로 그리시오.
2) 대표적으로 고른 test tube에서 얻은 단백질을 전기영동 한 결과를 첨부하고 알부민을 찾아 표시하시오.
3) 실험을 통하여 얻은 결과를 설명하시오.

4. 고찰

본문내용

<실험제목>DEAE ion exchange chromatography
<실험목적>DEAE 이온교환수지법의 원리를 습득한다. 실험을 하기 위한 준비과정을 익히고 말의 혈청으로부터 albumin을 부분 정제해본다. 또한 albumin을 정제하기 위한 각 단계의 처리 과정과 그 이유를 이해한다.
<결과 및 토의>
1. 7 개의 test tube에서의 A280을 값을 표시하고, 막대 그래프로 그리시오.

<중 략>

그러나 resin의 pH를 너무 높이게 되면 albumin 말고도 다른 단백질들까지 (-)전하를 갖게 되기 때문에 albumin만 (-)가 되도록 pH를 7정도로 맞춰준다.
일단 albumin을 정제해 주기 전에 resin을 만들어야 하기 때문에 DEAE cellulose resin 가루를 물에 녹여 column으로 옮기는데 resin이 가라앉아서 평평하고 촘촘하게 패킹되도록 기다리는 과정이 필요하다. 촘촘하게 패킹될수록 단백질의 binding이 잘 되기 때문이다. 패킹된 resin의 volume을 측정하여 CV라고 하는데, 실험에서는 1CV=1.7ml 으로 측정하였다. 그 후 증류수를 1 drop의 volume을 잰 결과 1방울당 32.258ul 인 것을 알 수 있었고, 1CV/2min의 속도로 떨어지도록 stopper를 조작해야 하는데 그렇게 되면 1초당 14.16ul, 즉 1방울이 못되게 떨어지므로 2초에 1방울씩 떨어지도록 stopper를 표시했다. 그 후 resin에 solution A, B, C를 흘려보내주는 과정이 필요한데, 강산과 강염기로 반복적으로 씻어주면서 (+)전하와 (-)전하를 번갈아 가지면서 activation하는 과정이다. 그리고나서 약염기 용액을 조금씩 떨어뜨려 주면서 pH가 7이 될 때까지 맞춰주는데, 약염기 용액은 10방울, 약 322.58ul 정도 떨어뜨려 주었다.

참고자료

· 김승호 외 1명, 단백질실험노트, 월드사이언스 2001.
· 전숭종, 단백질공학입문, 월드사이언스, 2007.김승호 외 1명, 단백질실험노트, 월드사이언스 2001.
· 전숭종, 단백질공학입문, 월드사이언스, 2007.
· 조문구, 생명공학을 위한 유기화학, 유한문화사, 2004.
· 조문구, 생명공학을 위한 유기화학, 유한문화사, 2004.