[생화학실험]DNS 법을 이용한 환원당 정량분석

소개

환원당(reducing sugar)을 DNS (3,5-dinitrosalicylic acid)와 Rochelle 염으로 발색하여 흡광도를 측정하는 당 정량법을 실험해 보는 레포트입니다.

목차

1. 실험 목적
2. 실험 이론 및 원리
3. 실험 시약 및 기구
4. 실험 방법
5. 실험 결과
6. 토의 사항
7. 참고 자료
8. 참고 문헌

본문내용

1. 실험 목적
(1) 화학물의 흡광도를 측정하여 정량 분석하는 것이다. 흡광도는 전자 전이에 따른 흡수물질의 농도에 따라 다르게 나타나기 때문에, 흡광도를 통해 정량분석을 할 수 있다. 미지시료의 흡광도와 표준용액의 흡광도를 비교하여 알 수 있다.
(5) 환원당(reducing sugar)을 DNS (3,5-dinitrosalicylic acid)와 Rochelle 염으로 발색하여 흡광도를 측정하는 당 정량법을 실험해 보자. 이 방법은 조작이 간편하면서도 저렴하게 원하는 결과를 얻을 수 있어 널리 사용되고 있다.
(2) 환원당(reducing sugar)의 성질을 이용하여 시료 중 환원당의 농도를 정량한다.
(3) DNS법의 원리는 환원당과 3,5-dinitrosalicylic acid가 반응하여 환원되어 생성된 3-amino-5 -nitrosalicylic acid의 흡광도를 측정하여 당을 정량한다. 당의 환원력은 당의 종류에 따라 차이가 있고 반응 조건에 따라 다르므로 상대적인 양의 함량만을 측정할 수 있다. 이 반응은 알칼리성에서 잘 일어나며 발색되기에 비 특이적이므로 모든 reducing compound와 반응한다.

<중 략>

첫째로, 증류수100㎖ + 디니트로살리실산0.75g + NaOH1.4g + Rochelle염 21.61g + 페놀 0.54㎖ + 0.59g로 DNS시약 제조를 할 수 있다. 두 번째는, 표준 당 용액을 제조하는데 책에 의하면 용액 1㎖당 0.2∼1.0㎎ 의 환원당을 함유하도록 시료를 제조한다고 하였으나 환원당이 너무 작으면 검출되지 않으므로 용액 70㎖에 글루코오스 30g을 넣고 제조한다. 세 번째는, DNS 3㎖에 표준당용액 1㎖을 넣어 끓는 물중탕에서 5분간 방치 한 후 상온으로 냉각시킨다. 이때 DNS는 NaOH로 중화적정하게 되는데 시 료를 제조할 때 HCl이 함유되었기 때문에 산성이므로 NaOH로 중화적정하 게 되고 0.1N농도의 HCl의 양은 10.43g이 된다.여기서 노르말농도에 대해 생각해 보면 용액 1L당 물질의 당량수로 HCl의 0.1N는 Assay가 35%이고 당량 수는 1이므로 으로 나타낼 수 있다.

참고자료

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