[분자생물학]HPLC of peptides and proteins

소개

펩타이드 단백질을 정제 함에 있어서 필요한 기기인 HPLC에 대한 이론을 소개한 자료 입니다.

목차

1. Basic Theory and Methodology
2. Liqiud Chromatogaphy의 종류
3. High Performance Liquid Chromatography
4. Retention and Bandwidth Relationships
5. Diagram of the retention parameters that describe a chromatographic separation
6. Capacity factor, k'
7. Equilibrium Distribution Coefficient
8. Selectivity Factors(Seperation factor, α)
9. Column Efficiency (N=Theoretical Plate Number)
10. Resolution
11. Reference

본문내용

크로마토그래피(Chromatography) : 혼합물의 성분물질을 이동상과 고정상을 이용하여 분리하는 방법

혼합된 시료성분이 이동상과 고정상 사이를 흐르면서 흡착, 분배, 이온교환 또는 분자크기 배제작용 등에 의해 각각의 단일 성분으로 분리되는 것을 말한다. 분리, 정성, 정량 등의 분석목적과 분리,정제, 분취 목적에 이용

이동상(Mobile Phase) : 시료성분을 주입구에서 검출기까지 이동시켜주는 역할을 하며, 분석 시 시료 성분들간의 분리 정도에도 영향을 준다.
고정상(Stationary Phase) : 컬럼 내 충진 된 물질,즉 충진제를 말하며 충진제와 시료성분과의 흡착, 분배, 이온교환, 분자 크기배제 등의 작용에 의해 혼합물이 단일물질로 분리가 일어나는 곳이다.

<중 략>

어떤 실험에서 크기인자가 일치하는 성분이 존재한다면 그 성분들은 분리가 안 된다. 이러한 혼합물을 분리할 때 컬럼에서 용출되는 각 성분의 분리상태를 나타내는 인자. 즉 이 α값은 시료중의 각 성분의 크기인자의 비로소 나타낸다. 예를 들면, 화합물 A와 B의 k'값이 같아서 α=1이라면 두 성분은 분리되지 않는 물질을 의미한다.

참고자료

· Methods in Molecular Biology Vol. 251 HPLC of Peptides and Proteins Methods and Protocols, p4~8