생화학실험 - 전기 영동을 이용한 분석

소개

제한효소 Hind Ⅲ, HaeⅢ, Bam HI, Eco RI를 이용하여 절단한 plasmid DNA를 Agarose gel 전기영동을 통해 분리시켜보는 실험이다.

목차

Ⅰ. 실험원리
Ⅱ. 실험기구 및 시약
Ⅲ. 실험방법
Ⅳ. 실험결과
Ⅴ. 고찰

본문내용

Ⅰ. 실험원리
(1) Plasmid DNA
플라스미드란, 세균의 세포 내에 염색체와는 별개로 존재하면서 독자적으로 증식할 수 있는 DNA의 고리 모양인 유전 물질을 말한다.
세포의 핵에 있는 유전자와 달리 세포질에 있다. 스스로 복제할 수 있는 능력이 있어서 특정유전자를 담아 증폭시키고 발현을 시키기도 한다. 세포 내 하나뿐인 염색체 내에 지니고 있지 않은 또 다른 형질을 부여하는 역할을 한다. 플라스미드는 다른 DNA 단편을 자기의 DNA에 연결해서 분열하고, 받아들인 DNA를 증가시킬 수가 있기 때문에 벡터 로 흔히 사용된다. 세균의 생존에 플라스미드의 존재가 필수적인 것이 아니며, 또 플라스미드는 다른 종의 세포 내에도 전달된다.

<중 략>

- EtBr로 약기. C21H20BrN3. 분자량 394.33. DNA의 검출이나 정제에 사용하는DNA 또는 RNA에 결합하는 색소. 2 중가닥DNA의 GC결합 사이에 정량적으로 들어가지만 외가닥DNA 또는 RNA에서도 약하게 결합하고, 자외선에 의 해 주황색이 강한 형광을 발생하기 때문에 전기영동한 DNA분자의 검출에 자주 사용한다. 또, 플라스미드의 폐환상 DNA보다도 결합량이 입체적으로 제한되어 비중에 차이가 생기는 것을 이용하여, 플라스미드의 정제에 사용된다. 발암성 물질이기 때문에 사용할 때에는 반드시 장갑을사용해야 한다. EtBr염색약은 자외선을 받아 가시광선으로 파장을 변화시키는 일종의 형광물질로써 푸른빛 계통의 짧은 파장의 빛을 붉은 빛 계통의 긴 파장의 빛으로 바꾸어 내보낸다. 254nm 파장의 UV가 DNA에 부딪힐 때 302~366nm의 파장으로 반사되는데 이 빛은 EtBr에 흡수된 후 590nm 정도의 가시광선으로 바뀐다. 즉 gel을 EtBr용액 속에서 staining 하면 EtBr이 DNA 이중나선의 염기 사이 에 끼어들어가기 때문에(intercalating), gel에 자외선(UV)을 쬐어주면 DNA에서 형광색이 나와 눈에 보이도록 해 주는 역할을 한다.

참고자료

· 전기영동 최신 프로토콜 / 강호일 저 / 월드사이언스 / 2006년 / p14-p25
· 생화학 / Mary K. Campbell / 라이프사이언스 / 2009년 / p361-p364
· 유전학 원론 제4판 / 김상구 외 5명 저 / 월드사이언스 / 2008년 / p439
· 의학세로생물학 / 이우윤 / 월드사이언스 / 2006년 / p166-p167
· 단백질실험노트 / 김승호 / 월드사이언스 / 2006년 / p17-p32