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단백질의 정량

*은*
최초 등록일
2013.07.21
최종 저작일
2012.04
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목차

1. 10R-1. Microplate에 의한 단백질정량방법을 설명하라.

2. 10R-2. ELISA (Enzyme-linked Immuno Sorbent Assay)를 설명하라.
-Direct Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay(ELISA)
-Indirect Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay(ELISA)
-Sandwich ELISA

본문내용

10R-1. Microplate에 의한 단백질정량방법을 설명하라.

■Microplate reader는 다양한 colorimetric application에 기본적으로 필요한 장비로, 한번에 하나의 sample값을 측정하는 cuvette type photometer와 달리 well plate단위로 다수의 단백질 정량, ELISA, cell viability / toxicity (MTT assay 등)를 한번에 multidetection mode로 측정할 수 있는 장비이다.

Microplate Reader ; Model 680

● 기본적으로 장착되어 있는 4개의 필터(415, 450, 490, 655nm)외에, 추가적으로 4개의 다른 필터 장착 가능
● 측정 가능 파장 : 400-750 nm
● Flat-, V-, U type plate를 모두 읽을 수 있고, 8 또는 12 strip plate도 사용 가능
● Channel 간의 변동값을 보정하고, 갑자기 검출값이 떨어지는 것을 방지하기 위하여 자동 보정기능이 첨가

<중 략>

즉, ELISA용 microplate에 코팅된 capture 항체를 항원과 결합시키고 항체와 결합하지 않은 시료를 세척한 후 detection 항체가 capture항체-항원 결합체와 반응하도록 하여 항원이 두개의 항체에 의해 “sandwich” 되도록 한다.
capture 항체와 detection 항체는 항원의 서로 다른 epitope와 결합하므로 2개의 항체-항원 간의 결합 부위가 서로 겹쳐지지 않아야 한다. detection 항체는 표지물질이 접합된 2차 항체와 결합시킨 후 흡광, 형광 또는 인광을 측정하여 시료를 정량하게 된다. 이 방법은 시료 내 항원의 양이 적거나 다른 간섭물질의 양이 분석하려는 항원의 양보다 훨씬 많을 때 유용하게 활용된다.

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