Basic Cell Preparation Technique

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Materials & Methods
4. Results
5. Discussion

본문내용

Abstract
이번 실험은 Cell counting에 쓰이는 Hemocytometer를 이용하여 특정 구역의 세포 수를 직접세어보고 그 방법을 터득하는 데에 목적이 있었다. 또한 염색약의 일종인 Trypan blue를 이용하여 살아있는 세포 수의 비율을 확인해본 결과 약 94.3 (%)의 viability가 나왔다. 이는 Trypan blue가 세포가 살아있을 때에는 선택적 투과성을 가지기 때문에 통과되지 않는 반면, 죽은 세포의 세포막은 통과할 수 있기 때문에 청색으로 염색이 되는 성질을 이용하여 cell counting 하여 계산한 값이다.

<중 략>

Materials & Methods
먼저 plate 안의 Old media를 제거해주고 난 후, dPBS 2ml로 plate를 washing 한다. trypsin을 0.5ml 처리 후, 37℃ incubator에서 2min incubation 해준다. trypsin은 10cm dish 1개 당 1ml 처리해준다. Incubation 후 flask를 cell이 떨어지도록 옆에서 여러번 쳐준다. Trypsin과 동일 volume(1ml)의 Media를 넣고 pipeting하여 cell 떨어뜨려 주고, 15ml conical tube로 옮긴다.cell을 counting하기 전에 hemocytometer를 70% EtOH로 깨끗이 닦고 cover slip을 덮어준다.

<중 략>

또 생존율을 측정할 때 주의해야 할 것은 trypan blue에서 세포를 염색하는 시간을 일정하게 유지시켜주어야 한다는 점이다. 염색시간이 지나치게 길어지면 원래 염색되지 않는 살아있는 세포도 청색으로 염색이 되고, 반대로 염색시간이 지나치게 짧으면 본래 염색되어야 할 죽은 세포가 미처 염색되지 못할수 있기 때문이다.
이번 실험을 통하여 hemocytometer라는 기구를 이용하여 cell 수를 측정하는 방법을 익힐 수 있었고, trypan blue 염색약이 살아있는 세포와 죽은 세포에서 어떻게 작용하는지의 차이를 파악할 수 있었다

참고자료

· Kang, S. S.외 6인, 생물과학, 3 E, 2000.아카데미서적. pp. 78-82