SDS-Polyacrylamide Gel Electrophoresis of Proteins(단백질 전기영동 예비)

목차

1. 실험목적
2. 실험원리
3.시약 및 기구
4.실험방법

본문내용

2. 실험원리
1)전기영동(Electrophoresis)
전기영동은 전기장을 띤 gel안에서 하전된 입자(이온)가 양극 또는 음극 쪽으로 이동하는 현상을 이용하여 물질을 이동 분리시켜 이들의 순도나 성질의 분석 및 분리 등에 사용하는 방법을 말한다. 전기영동법은 아미노산, 뉴클레오타이드, 단백질 등과 같은 전하를 띤 생체 고분자들의 성질을 연구하고 그것들을 분리하거나 분석하는데 매우 효과적인 수단으로 이용된다.
단백질 전기영동의 기본 원리는 DNA나 RNA 전기영동의 원리와 같다. 다만, 아가로스 겔(Agarose gel)대신 SDS를 이용한 폴리아크릴아마이드 겔(Polyacrylamide gel) 전기영동을 주로 이용한다는 것과 단백질을 눈으로 확인하기 위하여 EtBr 대신 코마시 블루(coomassie blue)나 실버(silver)염색 방법을 쓰는 것 등이 다른 점이다.

< 중 략 >

4.실험방법
① 조교선생님께 실험에 대한 전반적인 진행과정을 먼저 듣는다.
② 냉장고 맨 아래 왼쪽 서랍에서 casting되어 있는 gel을 꺼내온다.
(→ 조교선생님 허락없이 1조에서 1개 이상의 gel을 사용하지 않는다.)
③ 먼저 gel이 담겨있는 비늘을 벗기고, 안에 있는 용액은 전기영동장치에 모두 붓는다.
④ Gel을 싸고 있는 플라스틱의 글자가 앞으로 보이게하여, 아래쪽의 흰색 스티커를 제거 한다
⑤ 전기영동장치의 중간에 있는 흰색 고정 장치 앞 칸에 장착하고 뒤에 있는 다른 흰색 고정 장치를 가운데로 잡아당겨서 gel이 움직이지 않게 고정한다.
⑥ 고정되어 있는 gel 뒤쪽 위에 있는 comb를 빼낸다.
(→ Comb는 9개의 well을 고정하고 있는 것으로, 뺄 때 최대한 조심스럽게 위로 들어 올린다.)
⑦ 0.5X SDS MOPS Running buffer를 전기영동장치 앞, 중간, 뒤칸에 모두 가득 채운다.
⑧ 각 well에 넣을 marker(냉동실, 흰색 종이상자 안)와 sample(냉동실, 흰색 종이상자 안)을 준비한다.

참고자료

· 없음