Lysozyme의 분리(예비)

목차

1. 실험목적
2. 실험원리
3. Lysozyme의 반응 메커니즘
4. 원심분리법
5. 시약 및 기구
6. 실험방법
7. 참조자료

본문내용

1. 단백질(효소)의 분리의 방법
- 여러 물질이 섞여 있는 수용액에서 내가 원하는 단백질만을 추출하는 것이 목적이다.
- 내가 원하는 물질이 다른 물질과 구분되는 물성을 이용할 것이며 이 방법에는 다양한 방법이 존재한다.
- 염석, 투석, 여과, 크로마토그래피, SDS-PAGE, 등전집중법, 원심분리법등을 이용할 수 있다.
- 이후 잘 분리되었는지 확인을 위해서 추가적인 assay 기법이 필요하다.
(1) 염석법 (단백질의 분리 정제)
수용액 속의 단백질의 용해도는 수용액의 이온세기에 따라 달라진다. 수용액에 무기염이 첨가되면 염이 녹아서 이온이 되어 용액의 이온세기가 증가한다. 단백질의 용해도는 염이 첨가되면 증가(염용, salting in)하다가 염 농도가 일정 이상이 되면 용해도가 감소(염석, salting out)되어 단백질이 침전된다. 용액 속의 증가된 이온들이 단백질과 결합하고 있던 물과 결합을 형성하기 때문에 단백질들끼리 소수성 친화에 의해 결합하면서 침전하게 된다. 염에 의한 단백질의 침전 정도는 단백질의 종류에 따라 달라지지만 보통 분자량이 큰 단백질일수록 낮은 염 농도에서도 침전이 잘 이뤄진다. 단백질 침전물은 수용액을 원심분리하여 완전히 가라앉힌 후 분리할 수 있다. 염석법을 사용하면 단백질의 변성이 거의 일어나지 않는다.

< 중 략 >

6. 실험방법
(1) 250 mL 비이커를 0.00 g까지 측정한다.
(2) 이 비이커에 계란 3개의 흰자만 분리하고 비이커 무게를 0.00 g까지 측정한다.
(3) 흰자 부피의 1/10 정도의 증류수를 첨가 후 plate dish(E-coli 실험에서 고체배지 만들 때 사용하는 것)로 덮고 1 hr 동안 stirring 한다.
(4) 2번의 용액을 250 mL 비이커 입구에 거즈(1겹)를 덮고 움푹 들어가게 하여 고무줄로 입구를 묶고 용액을 안전하게 붓는다.→ 투명한 노란색 액체는 빠져 나오게 되고 흰거품만 남게 된다.
(5) 거른 용액 부피의 5%에 해당하는 과포화 NaCl 용액을 첨가한다.(→ 제조법: 과포화 NaCl을 증류수에 넣고 녹지 않을 때까지 계속 첨가한 후 더 이상 녹지 않을 때 가라앉은 NaCl은 그대로 두고 용액만 사용한다.)
(6) pH meter(보정용액은 냉장실에 있음)로 pH=11이 되도록 0.5N NaOH를 첨가한다.
수득률 = 실험에서 얻은 Lysozyme의 무게(g) / 계란흰자의 무게 * 0.3% (g) * 100%

참고자료

· http://users.rcn.com/jkimball.ma.ultranet/BiologyPages/L/Lysozyme.html
· http://en.wikipedia.org/wiki/Lysozyme
· http://www.ihanil.com
· http://k.daum.net/qna/view.html?qid=3CE7u
· http://www.unifr.ch/biochem/assets/files/schneiter/cours/Voet_Pratt/Voet_chapt_11.pdf
· http://www.google.co.kr
· http://www.kosha.or.kr/msds
· http://chemistrylab.chem.pusan.ac.kr/