Exp 4, 5 Restriction digestion & Western Blotting

소개

본 과제는 대구대학교 생명과학과
2011년 2학기 분자생물학실험에서 Restriction digestion & Western Blotting[제한효소처리와 웨스턴 블롯팅] 실험
관련 전문서적, 전공서적 및 다른 선배의 동일 실험 보고서를 참고 하여, 작성 되었습니다.
또한 실험에 충실히 참여하여 사진 자료도 첨부를 하였습니다.
평가 또한 최상으로 받았으며, 차후 실습 후 참고 하시어 보고서를 작성 하시는데 무리가 없으리라 사료 됩니다
* 과제 작성 완료후 참고문헌 작성시 아래의 문장을 같이 넣어 주시면 대단히 감사하겠습니다.

Jin Gwon Yu, 2011 Experiment of Mlecular biology Report[Restriction digestion & Western Blotting]. Daegu university, College of natural sciences Department of LifeScience, pp. 1-8.

목차

Ⅰ.서론
1. 실험목적
2. Additional explanations

Ⅱ.본론
1.실험과정

Ⅲ.결론
1. 고찰

-참고문헌

본문내용

1. 실험목적
Exp 4. Restriction digestion of the plasmid DNA
plasmid DNA를 제한효소 처리한 결과와 Exp 3. QIA prep Spin Miniprep kit using a Microcentrifuge의 결과와 비교해 보는 것이다.

Exp 5. Western Blotting
제한효소 처리된 Sample과 그 연장선상인 Blotting을 통해서, 정상적으로 처리 되었는가의 여부를 통해 최종결과를 얻는데 있다.

2. 실험재료 및 도구
Exp 4. Restriction digestion of the plasmid DNA
plasmid DNA, Xho1, Not1, tslh, , E-tube, agarose gel, 6x loading buffer, incubator(진탕배양기), Micro pipette, Ice, Spreader

<중 략>

9. Transfer kit를 조립해서, 공기방울을 제거하고 1시간 30분 동안 Transfer 시켰다.

10. 여과지를 blocking 하기 위해, blocking buffer를 넣고 4℃에서 1시간 동안 shaker를 이용해 섞어줬다.

11. PBS를 넣고, 5분간 shaker를 이용해 섞어주고, 버리기를 두 번 반복 했다.

12. 1st 항체가 담긴 액(PBST 9㎖, 항체 2㎕, blocking 용액 1㎖)에 여과지를 담가서, 하루 동안 섞어줬다.

2011.12.08

13. PBST 15㎖을 넣고, 두 번 세척 했다. 그리고 각각 5분 씩 기다렸다.

14. 여과지를 2nd 항체가 담긴 용액에 담가서, 2시간 동안 반응 시켰다.

15. 잡밴드를 제거하기 위해 PBST로 약 3회 정도 세척(=반응)시켰다.

참고자료

· Dong yun Lee, 2010. Experiment of Mlecular biology Report[Transformation]. Kyungpook National University, pp. 9-14.
· O Gwang Gwon. 2010. Experiment of Molecular biology Report[Transformation]. Kyungpook National University, pp. 14-24.
· cafe.naver.com/herbsworld.cafe?iframe_url=/ArticleRead.nhn%3Farticleid=465& * Western Blotting
· blog.naver.com/redplatypus?Redirect=Log&logNo=40002754705 * 제한효소 (restriction enzyme)
· terms.naver.com/entry.nhn?docId=424204 * 단백질흡입[법]
· Figure & Photo by Dae hyeon Lee [이대현 교수님] - 실험결과 by Jin gwon Yu [유진권] - 실험과정 및 결과