예비.Amplification of DNA and produce of recombinant DNA molecule

목차

1. 실험제목
2. 실험목적
3. 실험원리
4. 참고문헌

본문내용

1. 실험제목
Amplification of DNA and produce of recombinant DNA molocule

2. 실험목적
DNA 증폭과 재조합에 대해서 이해한다.

3. 실험원리
Recombinant DNA
유전공학적으로 외래의 DNA배열에 그 일부가 치환한 DNA분자를 의미하며 일반적으로 표적단편인 DNA분자와 매개체분자의 조합에 의해 형성되기 때문에 재조합DNA라고도 한다.
유전공학의 중심이 되는 유전자 재조합기술은 크게 세 과정으로 이루어진다. 다른 세포로부터 분리한 DNA 조각을 알맞은 벡터(vector, 유전자의 운반체)에 삽입시켜서 재조합 DNA를 만드는 과정과 제조한 재조합 DNA를 새로운 숙주세포(host cell)속으로 이입시키는 과정과 필요한 외래 유전자를 발현하는 숙주세포를 분리하는 과정이다.
1. Restriction enzyme의 정의와 기능
제한효소(restriction enzyme)는 주로 세균이 갖고 있는 DNA를 자를 수 있는 효소(endonuclease)이다. 이는 세균이 외부 DNA(virus)를 제거하기 위한 수단으로 만드는 것으로 세균 자신의 DNA는 methyl화시켜 보호되므로 피해를 입지 않는다.

제한효소에는 type I, II, III가 있으며 실험실에서는 주로 type II를 사용한다.
1) Type I restriction enzyme
DNA의 특정부위를 인식하긴 하지만 인식된 부위가 아닌 다른 부위를 절단한다. 즉, 인식부위는 특이성을 가지지만 그로부터 약 1,000 base pair가 떨어진 부위를 절단하기 때문에 원하는 부위를 선택하여 자르기가 어렵다. 따라서 이 효소들은 박테리아의 기능에는 중요하지만 실험목적으로는 잘 사용되지 않는다.

2) Type II restriction enzyme
인식부위와 절단부위가 모두 특이성이 있는 제한효소이므로 분자생물학 연구에 아주 유용하게 이용되고 있다. 실험에 쓰이는 제한효소는 특별한 말이 없는 한 type II를 말한다. 대부분의 type II 제한효소는 4개, 5개, 또는 6개의 염기서열을 인식하는데, 이에 따라 DNA 상에 인식부위가 나타나는 빈도가 달라지게 된다.

참고자료

· 생명과학대사전, 강영희, 아카데미서적, 2008.
· http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_molecular/gene_cloning_14.php (연세대학교 의과대학 생화학-분자생물학교실)
· http://library.thinkquest.org/C0118084/GM/Gene_splicing/Restriction_Enzymes.htm