Western Blot

목차

1. Object
2. Introduction
3. Material and Apparatus
4. Method
5. Results
6. Discussion
7. Reference

본문내용

단백질은 구조적 유지, 보호, 촉매, 수송, 방어, 조절과 운동 등에 관여한다. 특히 중요한 것은 촉매작용으로 알려진 기능인 세포내 화학반응 속도를 증가시키는 효소라고 불리는 단백질이다. 단백질은 상호작용을 할 작은 분자에 대하여 높은 특이성을 보이므로 일반적으로 각 화학 반응은 다른 효소를 필요로 한다. 어떤 단백질은 두 개 이상의 polypeptide로 이루어져 있다. 예를 들어 산소운반 단백질인 헤모글로빈은 기능성 단백질을 만들기 위하여 접힌 상태의 네 개의 쇄가 밀접하게 결합되어 있다. 이러한 단백질은 모두 독특한 아미노산 조성을 나타낸다. 그러나 모든 단백질은 모든 종류의 아미노산을 포함하지 않으며 각각 다른 아미노산이 같은

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Protein을 membrane으로 transfer 할 때 gel, membrane, filter paper의 순서에 주의한다. 또 gel running 이나 transfer 모두 전류가 반대로 흐르지 않게 주의한다.
Blocking 과정에서 깨끗한 실험 결과를 얻기 위해 완전히 녹인 skim milk를 사용하도록 한다. Ab ~ wash과정에서 membrane이 마르지 않게 주의하도록 한다. Develop 과정에서 암실에 들어간 후 빛이 들어와 film이 타는 일이 없도록 주의한다.
실험결과 1조는 필름에 아무것도 나오지 않았다. 처음 1분 정도 카세트에 넣어두었으나 밴드가 뜨지 않았다. 새로운 필름에 5분정도두고 다시 한 번 해 보았으나 역시 아무것도 뜨지 않았다

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6. Signal은 나오는데 약하다.
- Antibody의 titer가 맞질 않는 경우이거나 단백질의 상태가 좋지 않은 경우, 그리고 antibody의 affinity가 극히 낮은 경우에 발생할 수 있다.
7. Multi signal이 나온다.
- Antibody의 titer가 맞질 않는 경우이거나 blocking agent의 종류 및 농도를 잘못 결정한 경우이다. 항체의 품질과도 관련이 크다.
8. Band의 모양이 이상하게 나온다.
- Band가 smear하거나 위아래로 broad하게 나오는 경우 샘플에 문제가 있을 수 있다.

참고자료

· 분자생물학 노트, 유전공학연구소, 곽주원외 2인, 158~162p.
· Biochemistry, freedom, Jeremi외 2인, 65, 103p.
· 분자생물학, 아카데미서적, 김병흥 저, 315~317p.
· 단백질실험노트(하), 월드사이언스, 김승호,장규태(2001), 24~29, 122.
· 실험생화학, 한국생화학회 교재편찬위원회(1997) 420~423