SDS-gel electrophoresis, Western blot

목차

1. Introduction
2. Material and Apparatus
3. Method
4. Results
5. Discussion
6. Reference

본문내용

Introduction
[Western Blot]
Western blot은 찾고자 하는 단백질을 표적화하는 항체를 이용하여 항원-항체 반응을 통해 특정한 단백질을 검출해내는 기법으로 ‘immunoblot’이라고도 한다. 여러 단백질을 환원제로 용해시킨 후 SDS-polyacrylamide gel에 전기 영동한 후 nitrocellulose 또는 nylone membrane에 옮긴 후 단백질이 옮겨진 membrane에서 항원-항체 반응을 이용하여 특정 항체에 대한 단백질을 찾아낸다. 단백질을 옮기는 과정을 western blot 또는 western transfer 라고 한다.

[Western blot의 기본원리]
기본 원리는 전기영동과 blotting, 그리고 항원-항체반응이다.
우선 단백질의 혼합물로부터 특정 단백질을 검출하기 위해서 전기영동을 이용하여 크기 별로 분리한다.
단백질을 크기 별로 분리해낸 후에 단백질을 gel에서 membrane으로 이동시킨다. 이 과정에서도 단백질의 전하 특성을 이용하여, - electrode 쪽에 gel을, + electrode 쪽에 membrane을 놓아서 단백질이 membrane으로 이동하게 된다. 이 방법을 통해 크기 별로 분리된 단백질이 그대로 membrane으로 이동한다. membrane으로 옮긴 후에 찾고자하는 단백질에 대한 항체를 이용하여 그 단백질을 검출한다.

[SDS-PAGE]
Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis(SDS-
PAGE)는 생화학과 유전학 및 분자 생물학에 이용되는 단백질 분리 기술로, 그들의 전기 영동 이동성(polypeptide chain의 길이 또는 분자량 뿐만 아니라 Protein folding, Posttranslational modification과 다른 인자들에 의한)을 이용한 기술이다.

SDS-PAGE에서 단백질이 분리되는 원리
처음 단백질의 solution은 SDS를 첨가한 후에 분석된다. 이 음이온화 detergent는 2차 구조와 non-disulfide bond에 의한 4차 구조를 denature 시킨다.

참고자료

· http://en.wikipedia.org/wiki/SDS_PAGE, http://nanumlog.tistory.com/129
· 생화학; Nelson 저 | 백영환 역 | 월드사이언스 | 2010.03.10.
· 단백질 실험 핸드북; 죽승충신 저 | 강호일 역 | 월드사이언스 | 2007.03.15.
· 생화학; Mary K. Campbell 저 | 곽한식, 김재원, 김하근 역 | 라이프사이언스 | 2009.09.01