[서강대학교 현대생물학 실험레포트] Competent cell

소개

Competent cell에 대한 서강대학교 현대생물학 실험레포트입니다.

목차

1. Abstract
2. Introduction
3. Materials & Methods
4. Discussion

본문내용

이번 실험은 LB plate에 E. coli 숙주(DH5α)를 streaking하여 접종해서 배양한 후에, cell을 외부 유전자 삽입이 잘 되게 하기 위해서 competent cell로 만드는 것이었다. 대장균을 포함해서 대부분의 박테리아는 일반적인 조건에서 제한된 양의 DNA만을 도입한다. 이러한 박테리아를 효과적으로 형질전환하기 위해서는 외부 DNA의 도입능력을 강화하는 물리적, 화학적 처리를 거쳐야만 하는데 이러한 처리를 거친 세포의 상태를 competence라고 한다.

<중 략>

다시 한번 4℃, 4000rpm에서 10분간 원심분리하여 세포를 침전시키고 상층액을 버린 다음 차가운 4ml CaCl2와 4ml 30% glycerol을 첨가하여 다시 부유시킨다. 얼음 위에서 최종 부유액을 100μl씩 5개의 e-tube에 분주하고 이것들을 deep freezer로 급랭시킨 다음 -80℃에서 보관한다. 별도로 competent cell의 efficiency를 측정하기 위한 실험을 진행한다.

<중 략>

이번 실험에서는 한 개의 알코올램프를 사용하였는데 알코올램프를 여러 개 장치하고 실험대를 잘 소독한 다음 일부의 공간에 오염된 공기가 들어오지 않게 하고나서 조작하였다면 contamination의 가능성을 훨씬 줄일 수 있었을 것이다. 비록 무균조작을 위한 시설도 갖추어지고 모든 재료나 도구를 멸균하였다 하더라도, 그들을 무균적으로 이용하지 않으면 여전히 contamination의 기회를 제공하게 된다. 예를 들어 더러운 손으로 작업한다든지, 기침을 하거나 잡담을 함으로서 무균조작의 효과를 상쇄시키는 행동들은 삼가야 할 것이다.

참고자료

· Weaver, Robert F., 분자생물학(2nd ed.), 2003, 라이프사이언스, pp.147-150
· Madigan, Michael T., 미생물학(11th ed.), 2006, 월드사이언스, p.345, pp.348-350
· Prescott, Lansing M., 미생물학(6th ed.), 2005, 라이프사이언스, pp.112-113