Bradford Assay (단백질 정량법)

소개

실험레포트

목차

I. Title

II. Principle & Purpose

III. Materials

IV. Methods

V. Result

VI. Discussion

VII. Reference

본문내용

I. Title : 단백질 분리정제 및 기능분석 - Bradford Assay (Protein 정량)

II. Principle & Purpose
미리 농도를 알고 있는 Standard 용액을 이용하여 농도를 모르는 sample의 농도를 구할 수 있다.
Bradford Method는 단백질에 발색제를 가하여 가시광선 영역의 흡광도를 측정하는 정량법이다.
산성용액에서 Coosmassie Brilliant Blue 염료는 단백질과 결합하게 되고, 이로 인해 염료의 최대 흡광도는 465nm에서 595nm로 이동하게 된다. 따라서, 595nm에서의 흡광도는 단백질의 농도와 비례하므로 정량이 가능하게 된다.
- BSA protein (Bovine Serum Albumin)
혈청에 녹아있는 단백질의 한 종류로 송아지의 피에서 혈액 단백질인 알부민을 정제한 것.

<중 략>

VI. Discussion
우리 조는 96well 에 용액을 분주할 때, Blank를 채우지 않아서 UV spectrophotometer로 흡광도를 측정하는 과정에서 ‘기준점’ 설정이 제대로 되지 않았다. 즉, Standard 용액에서 BSA를 넣지 않은, 1X의 Bradford 시약의 흡광도를 기준으로 나머지 standard 용액을 이용해 standard curve를 그려야 하는데 그 과정이 생략되면서 다른 조에 비해 전체적인 흡광도 수치가 높게 나왔다. (원래는 blank 영역의 3개 수치의 평균을 각각 값마다 빼줘야 한다.) blank 는 일종의 대조군이기 때문에 실험 결과에는 큰 영향은 미치지 않는다. blank를 다시 채우고 흡광도를 측정해볼까도 생각했지만, bradford assay는 bradford시약에 의한 발색이 일어나는, 발색을 통한 정량법이므로 시간에 따른 결과에 영향이 크므로 standard나 sample용액은 이미 분주한 후 시간이 많이 지났고 blank에만 다시 용액을 채워서 측정한다 하더라도 다른 용액과의 분주된 시간 차이가 나므로 결과값이 정확하지 않을 것이라고 예상했다.

참고자료

· http://blog.naver.com/nickjung2?Redirect=Log&logNo=150031544212 (2012.04.04)
· http://cafe.naver.com/goondae.cafe?iframe_url=/ArticleRead.nhn%3Farticleid=367387&