plasmid DNA 순수 분리

소개

dna의 순수분리 과정 실험보고서

목차

1.실험제목
2.실험날짜
3.실험목적
4.실험기구
5.실험원리
6.실험방법
7.실험결과
8.실험고찰

본문내용

1.실험제목: plasmid DNA 순수 분리
2.실험날짜: 11월 1일 맑음
3.실험목적: 이전 시간에 우리가 만든 M15 competent cell에 Plasmid의 삽입을 위 해 DH5α의 대장균에서 형질전환 된 DNA(Plasmid)를 뽑고, DNA의 순도 와 양을 측정한다.

4.실험기구: ET-tube, 파이펫, 원심분리기, 얼음, tube, SV column, solution1,2,3,
AW, PW, colony 배양액, EB,

5.실험원리
※세가지 종류의 시약
· Solution I : 50 mM glucose, 25 mM Tris-Cl, pH 8.0, 10mM EDTA, RNase
EDTA는 세포벽의 integrity를 유지하는데 필수적인 calcium ion을 제거하여 세포벽 이 군데군데 무너지게 한다. 이때 glucose는 삼투압을 유지시켜 세포의 외형을 유지 시켜주고, 세포가 완전히 깨지게 되면 chromosomal DNA가 잘게 깨지게 되어 plasmid DNA와 구분할 수 없게 된다. 따라서 세포를 유지시켜가면서 세포벽만 깨는 것이다.

<중 략>

8.실험고찰
이번 실험은 pQE-eGFP가 삽입되어 있는 DH5α 대장균에서 DNA(plasmid)를 추출하고, 그것의 순도와 양을 측정하는 실험이다. 이 과정을 하는 이유는 다음 시간에 우리가 만들어 놓은 M15 competent cell에 DH5α 대장균에서 추출한 DNA를 삽입하기 위해서 이다. 오늘 한 실험은 제대로 형질전환 되었는지 확인하기 위한 작업이다. 대장균에는 DH5α와 M15 대장균이 있는데 DH5α 대장균에서는 plasmid를 증폭시켜 DNA의 양을 많이 얻을 때 사용하는 대장균이고, M15 대장균은 represor나 inducer에 의해 단백질을 만드는 대장균으로 단백질을 얻을 때 사용하는 대장균이다. 우리가 하는 전체적인 실험 과정을 살펴보면, DH5α 대장균에서 DNA를 추출하고, 이 DNA의 불순물을 제거 후 우리가 미리 만들어 놓은 M15 competent cell로 옮겨서 단백질을 추출하는 것이다. 이 전체적인 실험 과정 중 우리는 DNA를 뽑고 그것의 불순물을 제거하는 과정을 했다.

참고자료

· 없음