[생물학 실험 레포트] 동결세포해동 (cell thawing)

소개

동결 세포 해동(cell thawing)에 대한 생물학 실험 레포트입니다.

목차

1. 실험목적
2. 실험재료1)
3. 실험방법
4. 실험결과
5. 고찰
① DEFINE MEDIUM과 UNDEFINE MEDIUM의 구분 및 차이
② SERUM FREE MEDIA의 정의와 이를 사용하는 이유

본문내용

3. 실험방법
㈀ Liquid nitrogen freezer(-196℃)에 보관된 cryotube를 조심스럽게 꺼낸다.
* 액체질소의 초저온으로 인해 화상우려가 있으므로 주의

㈁ 최대한 신속하게 waterbath에 cryotube를 살짝 담그고, 60초간 해동시킨다.
천천히 녹일 경우 해동되면서 결정이 생길수 있다. 결정은 세포에 피해를 준다.
waterbath 36.5℃, 이 이상으로 녹일시 세포에 피해

㈂ 완전히 해동되면, 70% 알콜로 cryotube를 소독한다.

㈃ pipette을 이용하여 해동된 cryotube에서 동결보존배지를 15ml tube로 옮긴다.
* 장기간의 보관으로 인해 세포가매우 약해진 상태이므로 파이펫팅은 매우 조심스럽게 한다.
NIH-3T3 cell는 비교적강한세포

㈄ 위의 15ml tube에 일반 배지를 조심스럽게 10ml넣고, 1500rpm에서 5분간 원심분리한 다.
동결보존제 DMSO는 세포에 독성이 있으므로 FBS가 있는 배지 섞음,

㈅ Trypsin-EDTA를 1ml 넣고 60~90초간 incubarion한다.
Trypsin-EDTA처리시 passage number가 1상승한다.
이번실험의 경우 passage7→passage8

㈆ 세포가 잘 떨어졌는지 확인한 뒤, media를 5ml 넣고 세포를 모아준다.
pipetting을 할 때 거품이 생기지 않도록 주의한다.
세포를 모을 때 dish 바닥에 세포가 모두 떨어지도록 파이펫으로 모아준다.

㈇ 모아진 세포를 15ml tube에 넣고, 1500RPM에서 5분간 원심분리한다.

㈈ 상층액을 Suction한뒤, 동결보존배지를 1ml넣고 resuspension 해준다.

㈉ resuspension 된 세포 용액을 cryotube에 넣는다.

㈊ Isopropyl container에 넣은뒤, deep freezer(-70℃)에서 2~3일단 보관한다.
차후 실험을 위해 Liquid nitrogen freezer(-196℃)에 보관한다.
Isopropyl container: 냉동보관하는 세포의 온도를 천천히 떨어뜨려서 삽자기 세포가 shock하는 것을 방지한다.

참고자료

· 없음