서강대학교 현대생물학실험1 레포트 - Preparation of antibodies SDS PAGE & Western blotting

소개

서강대 생명과학과 현대생물학실험1 레포트

목차

1. Abstract

2. Introduction

3. Material & Method

4. Result

5. Discussion

6. Reference

본문내용

1. Abstract
이 실험은 E.coli에서 과발현시켜 정제한 His-tagged GFP를 항원으로 사용하여 mouse에 injection하고, 이를 통해 생성된 항체와 SDS-PAGE, Western blotting을 이용해 소량의 목적 단백질을 검출해보고, SDS PAGE와 Western blotting 방법에 대해 이해하는 것이 목적이다. 항원은 3주에 걸쳐 매주 mouse에 injection하고, 면역반응 반응을 촉진하기 위해 Freund`s adjuvant와 함께 injection한다. 3주 후 쥐를 해부하여 심장에서 혈액을 취하여 항체를 준비한다. Induction 전과 후, flow through(FT), wash1(W1), GFP, marker 등의 샘플로 SDS-PAGE를 실행한 후, 절반의 gel은 coomassie brilliant blue(CBB) 용액을 통해 염색했다. 나머지 반의 gel은 membrane으로 transfer한 후, 앞서 쥐에서 추출한 항체를 1차 항체로 사용해 반응시키고, 이 1차 항체를 항원으로 인식하며 alkaline phosphatase(AP)가 conjugation되어 있는 항체를 2차 항체로 사용하여 반응시켰다. AP의 기질인 BCIP/NBT 용액을 membrane에 처리하여 발색 반응이 일어나는 것을 관찰했다. 또한, transfer가 끝난 gel도 CBB 용액을 통해 염색해 보았다. 본 실험자의 경우 실험에 사용된 잘못된 membrane을 사용하여 옳은 실험 결과를 얻을 수 없었고, 다른 실험 결과를 첨부했다. 실험 결과 figure.1~5와 같은 모습을 얻을 수 있었다. AP와 기질에 의해 보라색의 발색 반응이 일어난 것을 관찰할 수 있었는데, 이를 통해 membrane에 목적 단백질이 존재하고, 그와 반응하는 항체 또한 존재한다는 것을 알 수 있었다. 쥐에 GFP 항원 대신 PBS 만을 injection하여 얻은 negative control 항체에서는 보라색 발색반응이 일어나지 않은 것과 비교해 볼 때, GFP에 대한 항체가 원래 쥐에 존재하던 것이 아닌, 쥐에서 생성된 항체임을 알 수 있었다.

2. Introduction
항원 항체 반응은 생물체 및 시험관 내에서 일어나는 항원과 항체의 특이적 반응 및 그에 따른 각종 현상으로, 혈청·면역반응이라고도 한다. 특정한 항원에 의하여 생성된 항체는 면역에 사용된 항원에만 강하게 반응하고 다른 항원과는 원칙적으로 반응하지 않는다.

참고자료

· David L. Nelson ․ Michael M. Cox, 레닌저 생화학, 월드사이언스, 2006, pp. 180~181
· 한국생화학회, 실험생화학, 탐구당, 1997, pp. 100~101
· Janeway 외, 면역생물학, 라이프사이언스, 2002, p. 68