[생화학 실험보고서] 원심분리기를 이용한 시금치의 cloroplast 분리실험

소개

원심분리기의 종류에 대한 설명 및 이를 이용해 시금치에서 염색체를 분리하는 실험입니다.

목차

1. 원리

2. 시약 및 기자재

3. 실험방법

8. 실험결과

9. 고찰

본문내용

1. 원리
1) Centrifugation이란 원심력을 이용해 혼합물을 분리하는 과정으로 gravitational force를 높임으로써 pellet이 tube의 밑에 보다 잘 침전되도록 할 수 있다. solution인 supernatant는 pellet을 건드리지 않고 다른 tube에 옮김으로 해서 pellet과 구분된다. centrifugation의 rate는 sample에 걸리는 acceleration에 의해 구분되어지며 보통 g로 측정되어 사용된다. centrifugation의 종류에는 differential centrifugation, isopycnic centrifugation, sucrose gradient centrifugation등이 있다.

2) Centrifuge의 종류

centrifuge를 나누는 특성에는 speed와 capacity가 있다. 보통 3가지 type으로 나누는데 첫째로 micro centrifuge가 있다. 이 centrifuge는 1~2 ml plastic tube를 12,000 ~ 13,000 rpm으로 회전시킨다. 둘째로는 large superspeed centrifuge로서 20m000rpm까지 speed를 낼 수 있으며 다양한 size의 tube를 사용가능하다. 마지막으로 ultracentrifuge가 있는데 이는 70,000rpm까지 속도를 증가시킬 수 있으며 tube의 size는 rotor의 크기에 따라 다르다.

3) centrifuge에 사용하는 Rotor의 종류에는 여러 가지가 있으나 대부분 3가지 class로 구분된다.
- fixed angle rotor : 대부분 사용되는 rotor
- swinging bucket rotor : horizontal하게 회전하여 particle의 movement를 길게 함
- vertical rotor : vertical하게 회전하여 particle의 movement를 최소화함

4) Ferricyanide Photoreduction
이 방법은 ferricyanide가 chloroplast의 envelope를 통과하여 electron transport system과 react하지 못하는 성질을 이용하기 때문에 망가진 chloroplast가 존재하여야 가능한 방법이다. chloroplast preparation은 osmotic shock을 주기 전과 준 후의 ferricyanide의 reduction의 비교를 통해 이루어진다.

참고자료

· 없음