[생화학 실험보고서] His-Tag 항체를 이용한 Western blot 분석

소개

Western blotting의 실험 방법을 익히고, 실제 western blot data를 Coomassie Brilliant Blue staining data와 비교하여 그 차이점을 고찰한다.

목차

1. 목적

2. 원리

3. 시약 및 기자재

4. 실험방법

5. 실험결과

6. 고찰

7. 참고문헌

8. 추가문제

본문내용

1. 목적
Western blotting의 실험 방법을 익히고, 실제 western blot data를 Coomassie Brilliant Blue staining data와 비교하여 그 차이점을 고찰한다.


2. 원리
1) Blotting의 종류
i) Southern blotting : DNA molecule을 agarose gel로부터 membrane으로 옮긴 후, 특정 DNA sequence를 probe로 사용하여 detection 해내는 방법.
ii) Northen blotting : Northern blot은 Southern blot과 같은 원리이며, DNA 대신 특정한 RNA를 detection하는 방법이다.
iii) Western blotting : Antigen-Antibody reaction을 이용하여 여러 protein 혼합물 중에서 원하는 특정 단백질만을 찾아내는 방법. Immunoblotting이라고도 하며 원하는 protein에 대한 high-quality antibody가 필요하다.

<중략>

4. 실험방법
7-1) SDS PAGE gel 만들기
7-2) Sample 준비
7-3) Gel electrophoresis
1) Gel caster에서 gel을 떼어낸 다음 tank에 장착하고 tank buffer를 채운다.
2) Sample을 loading한 후 dye가 바닥에 닿을 때까지 running한다.
7-4) Trasfer
1) Membrane, Wattman paper (4장 준비)를 sponge 크기에 맞게 미리 자른 후 transfer buffer에 담가둔다.

<중략>

2) Monoclonal antibody와 polyclonal antibody의 차이점을 정리하시오.
Antibody는 monoclonal(단일클론), polyclonal(다클론) antibody로 구분할 수 있다. 단일클론항체는 보통 mouse에 20~30개 정도의 합성된 peptide뒤에 KLH나 ovalbumin 것을 달아 injection해서 면역반응을 유도한 뒤에 spleen에서 면역세포를 분리하여 항체를 잘 만드는 면역세포를 분리한 후 암세포와 fusion시켜 키운 후 그 배지에서 항체를 분리한 것이다. 즉, 하나의 항원부위만을 인지하는 하나의 세포로 부터 만들어진 것으로 한 종류의 항체만으로 구성된다.

참고자료

· 없음