Blotting

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Blot

우리가 플라즈미드나 염색체같이 커다란 DNA 분자를 갖고 있는데, 이 중에서 염기서열을 알고 있거나 혹은 유사한 염기서열을 갖고 있는 특별한 유전자의 위치를 알고 싶어 한다고 가정해본다. 먼저 표적 DNA를 제한효소로 자르고 겔상에서 DNA 조각들을 분리한다. 그 다음에 이 DNA 조각들을 나일론 막에 옮긴 후에, 이 나일론 막을 표지된 DNA 탐침 분자들이 들어있는 용액에 담근다. 그 탐침자는 염기쌍의 짝짓기가 가능할 만큼 충분히 그 서열이 유사한 조각들에게만 결합을 할 것이다. 일반적으로, 결합한 탐침자의 위치는 방사선자동사진법을 이용하여 알 수 있다. 이렇게 DNA와 DNA의 혼성화를 서던 블랏팅(Southern blotting)이라고 한다. 서든 블랏팅은 그 고안자인 서던(Edward Soutem)의 이름을 따서 명명된 것이다. 아래는 Southern blotting을 보여주는 그림이다.

표적 분자가 RNA인 혼성화 실험은 노던 블랏팅(Northern blotting)이라고 명명되었다. 예를 들어, DNA 탐침자를 이용해서 이 탐침자와 동일한 유전자에 해당하는 전령 RNA의 위치를 알 수 있다. RNA들은 겔상에서 분리되어 필터로 옮겨진 후에, 이 필터는 앞에서 묘사된 대로 탐침자 처리가 된다. 서로 다룬 RNA 샘플들 사이에서 특정 RNA의 발현 양상을 비교하는데 쓰이는 기법이 Northern blotting 이다. RNA는 크기에 따라 전기영동을 통해서 분리 된 후, 얇은 막으로 옮겨진다.

참고자료

· DAVID P. CLARK 외 1명. 2007. 알기 쉽고 재미있는 분자생물학. 라이프사이언스, p.254-255.