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이종세포의 IFA기법을 통한 구분
면역학 레포트로써 HT-29 cell line과 MPAEC cell line을 두 세포주에 대해 항원항체반응을 일으킨 후 이를 형광현미경으로 관찰한 실험입니다.
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최초등록일 2012.06.11
최종저작일
2011.09
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소개
면역학 레포트로써 HT-29 cell line과 MPAEC cell line을 두 세포주에 대해 항원항체반응을 일으킨 후 이를 형광현미경으로 관찰한 실험입니다.목차
1.purpose
2.materials
3.mathod
4.result
5.discussion본문내용
1. Purpose
사람의 혈장 내 자연항체에 의한 이종 및 동종 세포 표면 분자에서의 항체 결합 반응을 IFA기법으로 확인한다.
2. Materials
인간 장 상피세포 (HT-29), 돼지 혈관 내피 세포주(MPAEC), 혈장 (열 비활성화 시킨 혈장), 2차항체 (Anti-Human IgG-fitc), PBS, Paraformaldehyde(PFA,세포고정), Hoechst, 1.7ml tube, pipette, tip, timer, 4 well plate, mounting solution, icebox, ice, 호일, 형광현미경
3. Method
1) 혈장 준비
- 말초 혈액을 원심분리하여 상층액을 확보한다.
- 56℃에서 30분간 배양하여 열 비활성화 시킨다 보체계 불활성화
2) 세포 준비
- MAPEC (5x10^4), HT-29 (1x10^5)를 counting 하여 4 well plate에 seeding한다.
- 37℃에서 24시간 배양하여 잘 부착시킨다.
3) Pipet을 이용하여 각 well에서 배지를 제거하고 PBS 400ul씩을 넣어준 후 다시 제거한다. (washing 2회 수행)참고자료
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