생화학실험보고서<단백질정량>

소개

시료의 흡광도를 측정하여, 그 속에 포함되어있는 단백질(라이소자임)의 농도를 알아내는 실험보고서입니다.

목차

없음

본문내용

2) biuret방법
두 개 이상의 펩티드 결합을 가지고 있는 단백질은 알칼리성 용액에서 묽은 황산구리로 처리했을 때 자주색을 띠는 물질을 생성한다. 색깔은 구리원자가 두 개의 펩티드 결합에서 오는 네 개의 -NH기 사이에서 배위화합물을 형성함으로써 생기는 것이다. 이는 알칼리성 와 반응하여 보라색의 착화합물을 만든다. 이 원리를 이용하여 단백질을 정량하는데 보통 이 방법으로는 약 1~10mg의 단백질을 정량할 수 있지만 미량뷰렛법은 약 0.25~2.0mg까지 정량할 수 있는 감도를 가진다. 착화합물의 색은 1~2시간 동안은 안정하지만, 그 이상의 시간에서는 점점 색도가 증가한다. 시료에 또는 rochelle염과 를 가하여 540~560nm로 흡광도를 측정하거나, 와 NaOH 혼합액을 시료에 혼합하여 263nm, 310nm의 흡광도를 측정하는 방법이다. 뷰렛 실험은 단백질 back bone의 펩티드 결합을 이용하는 방법이므로 모든 단백질에 대한 재현성이 좋은 편이다. 그러나 감도가 1mg/ml정도이며 Pro은 복합체 형성에 참여할 수 없고 가 로 환원하기 때문에 감도가 낮다.

참고자료

· http://rarorilove.blog.me/30036524989,http://jobsite.tistory.com/51(biuret방법)
· http://blog.naver.com/oceanfresh?Redirect=Log&logNo=30037989101(흡광도측정법)