(식물생리학) 뷰렛방법(biuret method) 단백질 정량

소개

A학점 받은 식물생리학 실험 레포트 입니다.

목차

Ⅰ. Introduction
Ⅱ. Methods
Ⅲ. Result
Ⅳ. Discussion

본문내용

Ⅳ. Discussion
이번 실험에서는 biuret 방법을 이용해서 단백질을 정량하는 실험을 하였다. biuret 방법을 이용한 단백질 정량 실험은 정확성은 떨어지지만 신속하게 미량의 단백질을 정량할 필요가 있을 때 많이 이용되는 방법이다. 두개 이상의 펩티드 결합을 가지고 있는 화합물들은 알칼리성 용액에서 묽은 황산구리(CuSO4)로 처리해주면 뷰렛(NH2-CO-NH-CO-NH2)와 반응하여 보라색의 착화합물을 만든다.
이 반응은 2개 이상의 peptide 결합을 지니는 polypeptide, peptone, proteose와 같은 단백질 분해물과 단백질에서는 양성반응을 나타내지만 아미노산, dipeptide 비단백질 계 물질에서는 음성반응을 나타낸다. 그러므로 Biuret반응을 이용하면 어떤 물질이 tripeptide 이상의 단백질 관련 물질인지, 아닌지를 확인할 수 있다.
이번 실험시간에 우리조는 BSA standard solution 실험을 진행하였다. 이실험으로 BSA값에 따른 O.D값의 그래프를 그리는 실험이었다. BSA와 K-PO4 buffer를 농도를 달리하여 각각 1ml가 되도록 한 후, Biuret reagent 4ml씩 넣고 잘 섞어주고 반응이 충분히 일어나도록 20분 정도 실온에 둔다. 그리고 540nm에서 O.D값을 측정하여 standard curve를 그린다. 이 때 540nm의 파장에서 측정하는 것은 단백질 정량 시 청자색이나 적자색을 띠므로 이 색의 최대흡수파장을 사용하는 것이다.
이 실험을 통하여 나온 결과 값을 보면 BSA의 농도가 클수록 O.D의 값도 점점 증가함을 알 수 있다. 농도가 0.3일 때 O.D값이 조금 감소하였으나 이 부분은 실험시 사용했던 시료의 오차로 인한 결과값이라고 생각해 볼 수 있다. 이 결과값에 대한 standard curve를 그리고 그에 대한 방정식 y = 0.0039x + 0.0033를 구하였다.

참고자료

· 한국생화학회/실험생화학 제3판/탐구탕/1997/p.53-72
· http://blog.naver.com/rarorilove?Redirect=Log&logNo=30036524989
· Trudy McKee&James R.Mckee/박인국역/생화학 길라잡이/라이프사이언스/2006