Restriction digestion

소개

양식도 되어있어요!

목차

1. Introduction
2. Materials
3. Methods
4. Results
5. Discussion
6. References

본문내용

◆ 실험목적
- 단백질을 분리하는 방법 중 하나인 겔 전기영동을 실험함으로써 각 단계가 가지는 의미와 연관된 생물학적인 지식을 깨닫는데 목적을 두고 있다. 또한 분자 생물학 연구에서 빠질 수 없는 Pipet 사용법과 같은 간단한 실험 기법들을 손에 익히도록 하자.

 실험이론
- 전기영동이란?
핵산, 단백질 등의 분자는 전기적 성질을 가지고 있기 때문에 이들 분자에 전기를 걸어 주면 분자의 이동이 일어난다. 이때 분자의 질량에 따라 가벼운 분자는 빠른 속도로, 무거운 분자는 느린 속도로 이동한다. 이런 분자의 특성을 이용해 분자의 크기를 측정할 수 있다.
전기 영동에 필요한 것은 겔, 전기를 흘려 보낼 수 있는 전기영동 탱크, 전기가 흐를 수 있는 완충액(Buffer), 시료, 시료의 이동을 알 수 있는 loading dye, 시료의 크기를 정확하게 알 수 있는 size marker이며 시료가 DNA나 RNA와 같은 핵산인 경우에는 겔에 있는 핵산을 염색할 수 있는 Ethidium bromide, 형광 염색된 핵산을 관찰할 수 있는 UV light box등이 있다.
- 아가로오스 겔(Agarose gel)
분자가 이동할 수 있으며 전기가 통할 수 있는 반고형상태의 물질을 겔이라 부른다. 흔히 사용되는 겔은 크게 두 가지로 아가로오스로 만든 겔과 폴리아크릴아마이드로 만든 겔이 있다. 아가로오스 겔은 주로 DNA 및 RNA 등 핵산의 전기영동에 사용된다.
아가로오스는 해초에서 추출된 다당류로 만들어진 중합체이다. 아가로오스 겔은 사용이 간편하고 다루기가 쉽기 때문에 현재 가장 많이 사용되고 있다.
겔에 전기장이 주어지면, 음전하는 띠는 DNA는 양극으로 이동한다. 이때 DNA가 이동하는 정도는 DNA 크기, DNA 형태, 아가로오스 농도, 전기영동에 사용된 전압, 완충액의 조성 등, 여러 가지 요인의 영향을 받는다.
일반적으로 DNA 크기와 전기장에서의 이동성의 관계는 로그함수에 반비례한다. 즉, 큰 분자는 작은 분자보다 더 천천히 움직인다. 왜냐하면 큰 분자는 작은 분자 보다 겔의 구멍을 지나가기가 어렵기 때문이다. 즉, 아가로오스 겔의 농도가 높을수록 크기가 큰 DNA이 이동이 어려워진다. 따라서 아가로오스 겔의 농도를 적절히 조절함으로써 원하는 크기의 DNA를 분리할 수 있다.

참고자료

· 진단 분자생물학, 현문사, 정병균 외 4명
· 진단분자생물학실습, 청구문화사, 한국임상병리학과 분자생물학교수회
· 최신 분자생물학, 월드사이언스, 김철희 외 1명
· 전기영동 최신 프로토콜, 월드사이언스, 강호일
· http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_workshop/