[생화학실험] 단백질정량(Lowry assay) & 미생물생장(E.coli의 DCW측정)

소개

이 실험은 단백질을 정량한 후 E.coli를 점종하여 소비한 E.coli의 단백질 소비량을 측정하는 실험입니다.

목차

1. 날짜
2. 실험제목
3. 실험목적
4. 이론
5. 참고문헌
6. 재료
7. 실험방법
8. 결과
9. 고찰

본문내용

<생화학 2 및 실험> 예비 레포트
1. 날짜 : 2011년 9월 19일
2. 제목
미생물 생장곡선
3. 실험 목적
환원당과 단백질의 양을 정량하여 미생물의 생장곡선을 추정한다.
4. 이론
① DNS method
이 반응은 환원당의 aldehyde functional group(CHO)의 산화와 3,5-dinitrosalicyclic
acid(DNS)의 환원반응을 통하여 3-amino-5nitrosalicylic acid이 되는 반응을 통해 알
칼리성 조건에서 발색하는 것을 이용하여 정량한다.
다음을 반응식으로 살펴보면 다음과 같다.
② Lowry assay
이 방법은 용액 안에 들어있는 단백질의 양을 정량하는 방법으로, sample의 단백질
농도에 따른 발색정도를 이용하여 측정하는 방법이다. 알칼리성 조건에서 단백질의 펩
티드 결합과 ? ? ?의 산화반응을 이용하여 ? ?를 만들고, Folin-Ciocalteu
reagent(phosphotungstic acid와 phosphomolybdic acid의 혼합용액)과 반응시킨다. 이
반응은 방향족 아미노산의 산화와 Folin-Ciocalteu용액의 환원반응으로 이루어진다.
그리고 환원된 Folin-Ciocalteu용액은 750 nm의 흡광을 가지고 측정한다. 이를 가지
고 sample 안에 있는 Trp과 Tyr의 농도를 측정하는 방법이다. 이때 단백질의 농도가
0.01 ～ 0.1 ??에서 가장 최적이다.

참고자료

· Miller, G.L., Use of dinitrosalicylic acid reagent for determination of reducing sugar, Anal. Chem.,31, 426, 1959.
· Lowry, O. H. (1990) How to succeed in research without being a genius. Annu. Rev. Biochem.59, 1–27
· 농업미생물내지(2009.2.6) p16