Solvent Partitioning에 의한 엽록체 색소 분석

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Solvent Partitioning에 의한 엽록체 색소 분석
1. 서론 : Solvent Partitioning에 의한 엽록체 색소의 관찰
2. 목적 : 용매 분할 기법을 이용해 4가지 색소를 분리해 보고 각각의 색소별 파장에 따른 흡수도를 측정해 본다.
3. 재료 및 기구 : 시금치 잎 약 10g, 100% acetone(미량의 CaCO3 첨가) 50㎖, acetone(초자 기구 세척용) 200㎖, Petroleum ether(비등점 60-110℃) 60㎖, 92% methanol 100㎖, Diethyl ether 50㎖, 30%(w/v) KOH(methanol에 용해) 30㎖, 1㎖ 용량 pipet, 125㎖ 용량 flask 2개, 50㎖ 용량 test tube 2개, 100㎖ 용량 메스실린더, Separatory funnel, Buchner funnel과 여과지, 250㎖ 용량 flask, 진공펌프장치 or aspirator, blender, Spectrophotometer
4. 실험방법
① 큰 잎맥과 잎자루를 제거한 5g의 싱싱한 잎을 100% acetone 25㎖에 넣고 blendor로 곱게 갈아 homogenate를 얻는다.
② Homogenate를 Buchner funnel 장치로 여과하여 찌꺼기를 버리고 여과액을 얻는다. Buchner 여과장치 대신에 원심 분리하여 상등액을 취할 수도 있다. 이 용액에는 chlorophyll a와 b, 각종 carotenoid계 색소를 비롯하여 acetone에 용해되는 많은 무색의 분자들이 들어 있다.
③ 이 용액을 창가에 두고 빛이 투과하거나 반사될 때에 농축된 엽록소 분자의 형광현상(fluorescence)을 관찰한다.
④ 용액의 용량을 20㎖이 되게 acetone을 가하고 이를 Petroleum ether 30㎖이 들어 있는 250㎖ 용량 separatory funnel에 부어 넣는다. Funnel의 안벽을 타고 서서히 내려가게끔 35㎖의 증류수를 가한다.
⑤ Separatory funnel의 마개를 막고 거의 모든 chlorophyll이 상층액에 옮겨질 때까지 funnel을 서서히 회전시킨다. 흔들어 혼합하거나 세게 돌리면 두 층 사이에 emulsion이 형성되어 깨끗이 분리되는데 오랜 시간이 걸린다.
* 주의 : 이때 funnel내 gas의 압력이 증가하므로 왼손으로 funnel의 몸체와 마개부분을 잡고 (마개를 엄지와 둘째손가락 사이로 압박하게끔) funnel을 거꾸로 들고 오른손으로 천천히 stopcock부를 열어 gas를 방출한다. 이때 사람 얼굴에 향하지 않도록 조심한다.

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