IPTG induction

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최초 등록일
2011.07.13
최종 저작일
2010.09
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1. Introduction
Operon은 대장균이 단백질 발현을 효율적으로 조절하기 위한 체계이다. 그 중 Lac operon을 이용하면 특정 유전자를 형질전환 된 대장균에서 과발현 시킬 수 있다. 이번 실험에서는 E.coli(strain BL21) pGEX vector Lac operon에서 GST(Glutathione S-transferase)가 tag된 PIN2 protein을 과발현 시킨 후, GST tag에 Glutathione이 결합된 sepharose bead를 결합시키는 방법을 이용하여 purification 하였다. purification 한 후, 단백질의 농도를 측정하고 SDS-PAGE와 Coommasie staining을 통하여 단백질 분리 및 확인도 해 보았다.
실험에서 사용한 vector에는 lac operon의 구성요소인 lac I 유전자, lac operon promoter 및 operator가 있고, 구조유전자 대신 GST(glutathione S-transferase)와 PIN2가 있다. PIN2는, 조교님들께서 직접 제한효소를 사용하여 MCS 부위에 재조합시켜 넣으신 것이다.
위와 같이 bead를 이용한 단백질 분리방법 이외에도 다른 단백질을 분리 및 정제 방법에 대해서도 알아보았다.
1.1 황산암모늄분획
다량의 단백질을 포함하는 재료(혈청, 조직 추출액, 균체 추출액)로부터 단백질을 정제하는경우에 사용하는 방법이다. 황산암모늄((NH4)2SO4에 의하여 염석하는 방법이다.

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