LA배지_DNAEXraction_PCR_Ligation_Plasmid prep_Digestion 정리

소개

환경학도나 생명학도를 위한 정의들

목차

1. LA Medium preparation

2. DNA Extraction

3. PCR ( polymerase chain reaction)

4. Ligation and Transformation

5. Plasmid prep

6. Digestion

본문내용

1. Tryptone 10g
Yeast extracts 5g
Sodium chloride 10g
Agar pwder 15g 물 1L
2. Autoclave 한다
3. 볼을 델 수 있을 정도로 식었을 때 X-gal 500㎕, Ampicillin 2ml, IPTG 500㎕ 넣는다.
4. 패트리 디쉬에 이름, 날짜, 배지명을 표기하고 붓는다.
LA배지?
LA 배지는 LB배지에 엠피실린을 첨가하고, 그밖에 x-gal, ITPG를 넣은 배지이다.
LA 배지에 IPTG를 첨가하는 이유는 IPTG는 β-galactosidase의 활성의 유도물질이다. 따라서 lacZ 결손세포를 숙주로 하여 pUC계 plasmid vector DNA를 형질 전환할 때나, M13 phage vector DNA를 형질 도입할 때 배지에 IPTG 와 X-gal(TaKaRa Code No. 9031)을 첨가하여 놓으면 β-galactosidase 의 α-상보성에 의한 발색의 유무로 간편하게 재조합체를 선택할 수 있다. 또 lac promoter나 tac promoter를 갖는 발현 vector의 발현 유도제로써 사용한다.
Lactose operon의 경우 promoter다음에 operator위치에 평소에는 Repressor가 결합하고 있는 상태이다. 이 때 allolactose를 넣어주면 이것은 repressor와 결합하여 Lac operon유전자로부터 떼어내게 되고 이어 단백질 합성이 일어나는 것이다. 이 때 쓰이는 allolactose를 inducer라 하고 이와 비슷한 구조를 가지고 같은 기능을 보이는 화합물중 대표적인 것이 바로 IPTG이다. 다시말해 IPTG는 Lac operon에서 betagalactosidase가 만들어질 때 inducer로 사용되는 물질이다. Allolactose 대신 인공적인 화합물을 이용하는 이유는 IPTG의 경우 세포내에서 분해가 되지 않기때문에 항상 같은 양의 발현을 유도할 수 있기 때문이다. E.coli에서 쓰이는 단백질 발현벡터등에는 프로모터 뒤에 위 Lac operator가 있어 단백질을 발현하고자 할 때 IPTG를 넣어주어야만 충분한 양이 나오게 된다.

참고자료

· 없음