plasmid DNA분리 – kit 사용,DNA 농도 측정 – 분광광도계(spectrophotometer) 사용,DNA절단 – 제한효소(restriction enzyme) 사용

소개

plasmid DNA분리 – kit 사용
DNA 농도 측정 – 분광광도계(spectrophotometer) 사용
DNA절단 – 제한효소(restriction enzyme) 사용

목차

Theme
Date&name
Abstract
Method
-plasmid DNA분리
-DNA 농도 측정
-DNA절단
Principle
Results
Discussion
References
질문
plasmid DNA분리
1.Alkaline plasmid DNA preparation과 plasmid 정제 kit의 원리의 차이점은?
2.Kit를 사용하여 DNA를 분리하는 장점은? 단점은?
3.이 Kit를 제조한 회사 이름은?
4.이 회사가 제조 시판하는 다른 제품들은?
DNA 농도 측정
1.DNA의 농도를 측정하기 위하여 왜 하필이면 260nm에서의 흡광도를 측정하는가?
2.분광광도계의 원리는?
3.260nm에서 흡광도를 측정하기 위하여 사용한 cuvette는 무엇으로 만들어진 것인가? 또 플라스틱이나 유리가 아닌 이러한 재질의 cuvette를 사용하는 이유는?
DNA절단
1.제한효소 BamHI, EcoRI, KpnI가 각각 인식하여 절단하는 부위의 염기서열은?
2.각각의 제한효소마다 다른 buffer를 사용하는 이유는?
3.BamHI, EcoRI, KpnI 각각은 어떤 재료에서 얻어진 것인가?
4.이러한 제한효소는 어디에서 구입할 수 있는가?

본문내용

plasmid DNA분리와 DNA 농도 측정, DNA 절단을 하기 위하여 이번 실험을 하였다. plasmid DNA분리에서는 저번실험과는 다르게 kit을 사용해서 조금 쉽고 간편하게 plasmid를 분리할 수 있었고 분광광도계를 사용하여 앞 실험에서 정제한 plasmid DNA의 흡광도를 측정하여 농도를 계산하였고 제한효소를 사용하여 plasmid DNA를 절단해 보았다.
Method(실험방법)
plasmid DNA분리
5ml LB 배지에 plasmid를 갖고 있는 대장균을 접종하여 하룻밤 배양하고 (대장균:E.coli DH5α/pKY480) 1.5 ml tube를 준비하여 tube에 배양액 1.5ml을 넣고 1분간 원심분리하고 상등액을 버리고 다시 배양액 1.5 ml을 채운 후 1분간 원심분리하고 다시 상등액을 버리고 배양액 1.5 ml을 또 다시 채운 후 1분간 원심분리하고 상등액을 버리고 빈 tube를 5초간 원심분리하고 사용하여 tube 내의 액을 완전히 제거하였다 tube에 (Resuspension) buffer 1(RNase첨가) 250μl를 넣어 세포를 녹인 후 여기에 (Lysis) buffer 2 250μl를 넣고 tube를 부드럽게 반복하여 뒤집음으로써 용액이 투명해질 때까지 잘 섞고 5분이 되기 전에 (Neutralization) buffer 3 350μl를 넣고 다시 tube를 부드럽게 뒤집어서 잘 섞어 줬다 그리고 최대속도로 4℃에서 10분간 원심분리해준 후 상등액을 Binding colmn tube에 붓고 최대속도로 1분간 원심 분리한 후 여과액을 버리고 Washing buffer 700μl를 Binding colmn에 넣고 1분간 원심분리하고 여과액을 버리고 다시 2분간 최대속도로 원심분리하였다 그리고 2ml tube를 버리고 Binding colmn을 1.5ml tube에 넣고 (Elution) buffer 5 100μNA용액이므로 1.5ml tube를 잘 보관하였다.
DNA 농도 측정

참고자료

· 없음