PCR – taq polymerase -Agarose gel electropholysis

소개

PCR – taq polymerase 사용
Agarose gel electropholysis

목차

Theme

Date&name

Abstract

Method
-PCR
-전기영동

Principle

Results

Discussion

References

질문
1.각 lane의 DNA 조각수 및 조각의 크기(bp)
2.사용한 기기, 용액, 그리고 각 성분들의 용도,원리
4.Aga와 agarose의 차이점

본문내용

Abstract(요약)
PCR은 DNA의 특정 부위를 시험관에서 대량으로 증폭하는 기술인데 주형이 될 DNA와 원하는 부위를 합성하기 위해 미리 만든 primer, taq polymerase, 합성 재료인 dNTP, 결합을 도와주는 Mg2+를 가진 MgCl2를 넣어서 DNA 특정 부위를 증폭시켰고 그리고 Agarose gel을 통한 DNA ladder, pBSK(+), pKY480, pKY480(BamHI), pKY480(EcoRI), pKY480(KpnI)의 전기 영동에서는 각각의 합성된 부분에서 진하게 형광이 나타나서 각각의 DNA의 농도와 크기를 알아볼 수 있었다.
Method(실험방법)
PCR
멸균된 PCR tube에 다음 용액들을 넣어 섞는다(tatal50μl) 그런데 taq polymerase는 나중에 넣을 것이므로 이 때 넣어주지 않는다 water 29μl, 50% glycerol 6μl, 10x taq buffer 5 μl, band doctor 4μl, 10 μΜ Primer-1 2μl, 10 μΜ Primer-2 2μl, 10mM dNTP 1μl, Template DNA 1 μl(물90μl+원액10 μl중에서의 1μl)를 넣고 PCR 기계에 tube를 넣고 다음 조건으로 PCR 한다. Strp 01. 94℃, 1분 그리고 Strp 02. 85℃, 1분 이때 taq polymerase 0.3μl를 넣은 다음 Strp 03. 94℃, 1분-denaturation(첫번째 cycle 시작) 그리고 Strp 04. 55℃~65℃, 1분-annealing 그 다음 Strp 05. 72℃, 2분-polymerization(첫번째 cycle 끝) 그리고 Strp 06. 94℃, 30초(두번째 cycle 시작) 그리고 Strp 07. 63℃, 30초 그리고 Strp 08. 72℃ Strp 6 부터 Strp 8까지 그 다음 Strp 09. 72℃, 5분 그리고 Strp 10. 4℃, 보관 하였다.
전기영동

참고자료

· 없음