세포배양

소개

<세포배양>
세포배양에 대한 전반적이면서도 자세하게 다루었습니다.

목차

없음

본문내용

★ CO2 incubator의 상태
1) 온도.... 보통 37℃
2) CO2가스농도...보통 5%
3) 습도.... 90%이상
※ Clean bench ※
Clean bench는 상당히 위까지 열어도 좋지만, 얼굴이 바람이 와 닿는 정도로 열면, 작업중에 눈에 건조해지며, 조금밖에 열지 않으면 클린벤치내에 바람이 쉽게 빠져오지 못하므로, 턱높이 정도까지 연다.
▷ 살균등을 켠채로 작업하면?
배지를 흡입해낸 후의 세포에 직접 자외선이 닿으면, 짧은 시간이라도 DNA가 손상을 입어, 세포가 죽는다. Dish 뚜껑이나 배지를 통과하여 세포에 자외선이 미치는 경우는 없지만, 배지중의 성분이 분해·변질 될지도 모른다.
※ Autoclave ※
▶ autoclave 압력용기 바닥의 물량을 확인한다. 물량을 확인하는 센서는 물의 전도율을 인식하여 작동하므로 증류수인 경우 물이 없는 것으로 인식하므로 수돗물을 넣는다.
▶ 온도를 121℃로 설정하여 15분동안 작동시킨다.
<배지교환>
배지색 (pH 지시약으로서의 phenol red ; pH 7.4일때의 색깔을 기억해 둔다.)
▶ 산성에서는 노랗게 된다.
·세포가 유산등을 분비하기 때문에 점차 노랗게 변한다.
·대사가 왕성한 세포는 배지가 빨리 노랗게 변한다.
·암세포는 정상세포보다 빨리 노랗게 변한다.
▶ 알칼리에서는 핑크색을 띤다
탄산가스의 공급이 안될 경우.
★ 배지의 관리
▶ 거품은 단백질을 변질시키므로 배지중에 피펫에서 공기를 뿜어내어 거품이 발생하지 않도록 한다.
▶ 세포가 자라고 있는 dish에 배지를 첨가하는데 사용한 피펫은 피셋 끝부분에 떠있는 세포나, 때로는 모르는 사이에 dish에 붙어있던 잡균이 묻어있을지도 모르므로 다시 배지병에 넣지 않도록 한다.
※ 배지 ※
★ 배지의 종류
▷ EMEM (Eagle`s minimum essential medium)
; primary mammalian cell과 human diploid cell에 적당.
▷ DMEM (Dulbecco`s modified Eagle medium)
; 다양한 포유동물 세포주 배양에 일반적으로 사용.
▷ Ham`s F-12
; 원래 CHO (Chinese hamster ovary)세포 배양.
▷ IMDM(Isocove`s modified Dulbecco`s medium)
; 영양소가 많아서 고밀도 세포성장에 적당.
▷ Leibovitz`s L-15
; 5% CO2를 공급하지 않고도 세포배양을 할 수 있도록 만들어졌다.

참고자료

· 9) Reference
· 세포공학개론, Murakami외 1명, 경문사, 1997, p108~117
· 조직배양, 김승업, 민음사, 1994, p65~78
· 신경조직배양, 김승업, 민음사, 1996, p73~80
· General techniques of cell culture, Mauree A. Harrison외 1명, CAMBRIDGE, 1996, p69~88
· Culture of animal cells, R.Ian Freshney, WILEY, 199~216
· 세포배양노트, 정출이헌, 월드사이언스, 1998, p63~76, 115~143
· http://microscopy.org