NORTHERN BLOTTING 과 WESTERN BLOTTING

소개

NORTHERN BLOTTING 과 WESTERN BLOTTING 레포트

목차

<Northern blotting>
1. 원리
2. 용도
3. 방법
4. 참고사항
5. 실험절차
<Western blotting>
1. 원리
2. 방법
3. 용도
4. 참고사항
5. 사용증례

본문내용

1. 원리
써던 불롯팅이 DNA를 다루는 작업인 반면에 노던 블롯팅은 RNA를 다루는 기술이다. 노던
블롯팅은 우선 원하는 세포나 조직에서 RNA를 추출해서 RNA의 크기별로 한천 겔에서 전기영동을 통하여 분리하게 된다. 이것을 다루기 쉬운 nitrocellulose 흡착지나 nylon흡착지에 옮긴 후 원하는 보합결합시킨 후 자가방사기록함으로써 원하는 전령 RNA의 크기와 상대적인 양을 측정하는 것이다.
2. 용도
모든 단백이 만들어지기 위해서는 우선 그 단백의 유전자로부터 전령 RNA가 만들어져야 한다. 이것을 전사라고 하며, 노던 블롯팅은 전사된 전령 RNA의 크기와 양을 분석하는데 쓰이게 된다.
3. 방법
노던 블롯팅은 RNA를 분석하는 가장 일반화된 방법이라고 할 수 있다. 원리는 DNA를 분석하는 써던 블롯팅과 아주 유사하다. 조직이나 세포에서 RNA를 분리하는 방법은 여러가지가 있으나 가장 중요한 점은 그 실험실에서 가장 익숙한 방법을 사용하는 것이다. 많은 실험실에서는 cesium chloride 원심분리법을 주로 사용한다. RNA를 추출하는 것은 DNA를 추출하는 것 보다 상당히 까다롭다. RNA는 단일쇄 구조로 되어 있어서 RNA 분해효소(RNase)에 의해 쉽게 분해되며 또한 RNA 분해효소는 상당히 안정하고 조효소가 없어도 활성화 된다는 것이다. 따라서 RNA를 분해 되지 않도록 분리하는 것이 노던 블롯팅의 가장 중요한 과정이라고 할 수 있다. 그러므로 시약이나 초자기구를 RNA 분해효소에 오염되지 않게 준비하는 것이 성공하는 비결이라고 할 수 있다.
4. 실험절차
1) 조직 또는 배양세포에서의 RNA분리
a. 조직을 채취하여 PBS로 세척 후 guanidinium isothiocyanate용액을 조직 1g당 5배 비율로 섞은 후 신속하게 액체 질소에 동결 시킨다. 배양세포의 경우 75㎠ 플라스크당 1ml의 위 용액을 넣어 rubber policeman으로 긁어 낸다.

참고자료

· 없음