chromatography

소개

chromatography

목차

Propose
Materials
Method
Results and Discussion
Q. 대략적인 실험의 과정들이 의미하는 바는 무엇인가?
Reference

본문내용

Propose
Chromatography를 조사하여 종류와 원리를 파악하고 이해하자.

Materials
Ni-NTA resin, column, DW, 0.1M EDTA, NI-SO4,
Buffer A(20mM Tris(8.0), 500mM Nacl, 5% glycerol),
Buffer B(Buffer A + XmM imidazole)
Cell lysis sup

Method
1. Ni-NTA resin을 column에 0.5ml packing
resin은 bead를 뜻하며 이는 공기에 노출되면 좋지 않으므로 주의함

2. DW로 5CV washing
resin의 ethanol 제거위해 washing

3. 0.1M EDTA로 3CV washing

4. DW로 5CV washing 2회 실시
EDTA제거

5. 0.1M Ni-SO4로 3CV Ni recharge

6. DW로 5CV washing 2회

7. BufferA로 5CV washing

8. Cell lysis sup을 1.5ml loading
-loading전 sup100ul를 EP tube에 보관(Bf sample) --sample 1

9. 흘러나오는 nonbinding fraction을 12ml tube에 받는다. --sample2

10. BufferA로 5CV washing 3회 실시(각각을 tube에 받는다.) --sample 3,4,5

11. Elution(EP tube에 1ml씩 fraction을 받는다.) bufferB
- 20mM Tris(pH8.0), 100mM NaCl, 50mM imidazole로 5CV elution -sample 6
- 20mM Tris(pH8.0), 100mM NaCl, 300mM imidazole 로 5CV elution -sample 7
- 20mM Tris(pH8.0), 100mM NaCl, 400mM imidazole 로 5CV elution -sample 8

참고자료

· 4주차 수업내용 PPT 자료
· 생물물리, 기기분석
· 단백질체학
· 분자세포생물학 실험노트
· ttp://blog.naver.com/suhalin?Redirect=Log&logNo=100010121493