[생화학] Affinity Chromatography and SDS-PAGE

소개글

Ni-NTA affinity chromatography와 GST(glutathione S-transferase) affinity chromatography, SDS-PAGE에 쓰이는 buffer의 조성 각각에 대해 자세히 조사한 내용이 포함되어있습니다.

목차

1. Introduction
1) Affinity Chromatography
2) SDS-PAGE(sodium dodecyl sulfate - polyacrylamide gelelectrophoresis)
2. Materials and Methods
3. Results
4. Discussion
5. References

본문내용

세포 내의 실질적인 모든 활동은 세포 내에 존재하는 많은 단백질에 의해 이루어진다. 그렇기 때문에 단백질의 기능과 단백질 간의 상호 작용을 이해하는 것은 매우 중요하다. 단백질의 기능을 이해하기 위해서는 먼저 단백질을 정제해야 한다. 이번 실험에서는 단백질의 성질을 이용하여 단백질을 정제해 보도록 하겠다.

Afinity Chromatography는 정제하려고 하는 단백질에 특정한 표지(tag)를 한 후, 그 표지와 특이적으로 상호 작용하는 물질을 resin에 붙여서 그 물질을 정제하는 방법이다.
이번 실험에서는 His tag이 붙어있는 단백질을 Ni-NTA agarose resin을 사용하여 정제해 보겠다. 일반적으로 His tag은 6개를 붙이며, 이 tag은 크기가 작고, 전하를 나타내지 않기 때문에 단백질의 구조나 성질에 거의 영향을 주지 않는다.
Ni-NTA resin에 binding한 histidine은 histidine과 구조가 유사한 imidazole의 양이 많아지게 되면 histidine과 Ni과의 interaction이 약해져서 histidine tagged protein이 elution된다.

참고 자료

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