Agarose gel elecrtophoresis & Enzyme cutting

소개

Agarose gel elecrtophoresis & Enzyme cutting 리포트 입니다.

목차

1. 실험일자 :
2. 실험제목 :
3. 실험목적 : 분리한 플라스미드 DNA를 제한효소로 처리하여 알려진 Standard DNA크기와 비교하여 정확한 플라스미드 DNA의 크기를 확인한다
4. 실험이론
5. 실험방법
6. 참고문헌

본문내용

4. 실험이론
Ⅰ.전기영동
전기장 안에서 하전된 입자(이온)가 양극 또는 음극 쪽으로 이동하는 현상을 말한다. 이 때 이동하는 속도는 입자의 전하량, 크기와 모양, 용액의 pH와 점성도, 용액에 있는 다른 전해질의 농도와 이온의 세기, 지지체의 종류 등 여러 가지 요인에 의해 결정된다. 따라서 어떤 용액에서의 하전된 알맹이의 이동속도는 분자 자체의 성질에 따라서 결정된다. 그러므로 전기영동법은 아미노산, 뉴클레오티드, 단백질 등과 같은 하전된 물질들을 분리하거나 분석하는 데 매우 효과적인 수단으로 이용된다. 하전된 성분들로는 단백질과 같은 분자나 세포 또는 하전된 입자들도 있으나 분리기법으로서 전기영동은 주로 하전된 분자(이온)에 한정되며, 유동성 매체로 액체 또는 기체가 사용되지만 생물학적 시스템에 있어서는 액체를 주로 이용한다.
Ⅱ. Agarose gel 전기영동시 DNA의 이동에 영향을 주는 요인들
ⅰ DNA 분자의 크기가 클수록 느리게 이동한다.
ⅱ Agarose의 농도가 높을수록 느리게 이동한다.
ⅲ DNA 형태(구조)에 따라 이동속도가 다르다. 일반적으로 supercoiled DNA가 가장 빨리, 그다음 linear DNA, open circular DNA의 순으로 빠르게 이동한다.
ⅳ 부하되는 전압이 높을수록 이동속도가 빠르다.
ⅴ 전기장의 방향도 이동속도에 영향을 미친다.
ⅵ Ethidium bromide는 DNA 이동속도를 15% 정도 감소시킨다.
ⅶ 전기영동 완충용액의 성분과 이온강도도 전기영동 속도에 영향을 준다.
Ⅲ. Gel loading buffer

참고자료

· - 김영희 저, 분자생물학 실험서, 월드사이언스, pp79-83
· - Purve 외 3인, 생명 생물의 과학, 6판, 교보문고, p319
· - 김정국, 유전자 클로닝과 DNA의 분석 입문서, 5판, 월드사dl언스, pp186-191
· - 박상대, 필수세포생물학, 교보문고, p163