DNA elution

소개

DNA elution 실험입니다.
A+ 레포트 입니다.

목차

◎ Abstract
◎ Introduction
◎ Material & method
◎ Data & result
◎ Discussion
◎ Reference

본문내용

◎ Abstract
Double- strand DNA 분석에서 가장 널리 사용되고 있는 nagative agarose gel 상에서 분리된 DNA로부터 DNA 절편을 회수하는 방법을 이해하고, 다음에 하는 실험인 ligation & transformation의 준비 과정이라고 볼 수 있다.
PCR product로 인해 얻은 DNA band를 통해서 순수한 DNA만을 얻기 위해서 elution을 하였다. gel slice를 55℃에 녹이고 GB buffer, NW buffer, EB buffer로 washing& purificstion한다. 그리고 제한효소(XbaⅠ,BamHⅠ)를 처리 후에 전기영동을 시키고 거기서 얻은 gel을 다시 elution 시켜서 전기영동을 하여서 원하는 DNA를 얻었는가를 확인하여 본다. 정확히 PCR 복제되고 두 개의 제한효소에 특이성을 가지게 잘린 DNA를 band를 통해서 확인해 볼 수 있다. band는 명확히 보이지는 않았지만 너무 작은 양이기에 보이지 않았다.

◎ Introduction
PCR product를 전기영동하면 product의 크기를 알 수 있다. 그러나 과연 원했던 sequence와 완전히 동일한가 아닌가는 이것으로는 알 수 없다. 이를 확실하게 증명하려면 DNA sequencing을 하여야 한다. DNA sequencing을 하려면 우선 PCR한 DNA band를 정제(purification)하여야 한다.
gene을 특별한 primer에 의하여 PCR로 증폭을 시키고선 이렇게 증폭시킨 DNA를 보기 위해 gel electrophoresis를 실시하게 된다. 각각의 분리된 이들 DNA band에서 순수한 DNA를 정제하기 위한 Elution이라는 작업을 하게 되며 즉, 전기영동 되어진 gel을 cutting하게 된다. 이렇게 cutting되어진 gel에서 DNA을 순수하게 회수를 하게 되는데 이 작업을 Elution이라고 한다. Elution 되어진 DNA가 제대로 회수되었는지를 확인하기 위해서 회수된 양에서 일부를 다시 gel electrophoresis하게 되며, 그럼 남은 DNA를 restriction enzyme으로 우리가 증폭시키고자 하는 부분을 잘라내게 된다.

참고자료

· 없음