PCR 가이드

소개

The polymerase chain reaction (PCR)의 개념, 종류, 방법, 트러블 해결법까지 정리하여 파워포인트 발표 형식으로 제시함.

목차

1. PCR 이란
2. PCR 반응액 (주형 DNA, RNA, Mg2+, dNTP, 내열성 DNA polymerase )
4. Primer
5. 반응온도와 cycle 수의 설정
6. Gradient-PCR
7. SSP-PCR (Single Specific Primer-PCR)
8. PCR-RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism)
9. RT-PCR(Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction)
10. RQ-PCR(Real time quantitative)
11. Troubleshooting for PCR

본문내용

1. PCR 이란
The polymerase chain reaction (PCR)
:DNA 또는 RNA의 특정영역을 대량으로 증폭 가능한 기술
* Denaturation
너무 온도를 높이거나, 처리시간이 길면,
DNA polymerase 실활 가능.
* Primer annealing
annealing에 적합한 온도와 시간은
primer의 염기배열과 그 길이에 따라 결정.
* Extension
시간은 주형 DNA의 농도, 증폭단편의 크기,
반응온도에 따라 결정.
Thermus aquaticus (Taq) polymerase 사용 시
일반적으로 72℃, 30s-10min 처리.

5. 반응온도와 cycle 수의 설정
* Annealing 온도와 시간
Primer의 Tm 값에 유의하여 설정
목적단편 이외의 비특이적 증폭이 일어나면 온도를 올린다.
증폭이 잘 일어나지 않으면 온도를 낮춘다.

* 신장반응 온도와 시간
통상 72℃
목적단편의 길이에 따라, 1kb 이하의 경우는 1분으로 하며,
이 보다 긴 경우에는 1kb에 1분의 비율로 길게 설정.

* Cycle수
효소가 실활 된 이후의 cycle과
PCR 산물이 plateau(평형상태)에 도달한 후의
cycle는 무의미.
통상 30-35회

참고자료

· 없음