DNA 제한효소 처리 및 전기영동

소개

제한효소 처리는 Gene Cloning단계 중 Vector와 Insert를 추출하여 Purification한 후 Vector에 Insert를 삽입하기 위해 시행되는 단계이다. Vector와 Insert에 동일한 제한효소를 처리해 줌으로써 Insert가 Vector의 원하는 부위에 삽입될 수 있도록 점착성 말단부위(Sticky end)를 만드는 것이 그 목적이다. 두 가지 제한효소를 처리할 경우 DNA의 잘려진 부위가 스스로 다시 붙는 현상. 즉 Self ligation의 가능성을 줄일 수 있다.

목차

Abstract
Introduction
Material & Method
Results

본문내용

Abstract

제한효소 처리는 Gene Cloning단계 중 Vector와 Insert를 추출하여 Purification한 후 Vector에 Insert를 삽입하기 위해 시행되는 단계이다. Vector와 Insert에 동일한 제한효소를 처리해 줌으로써 Insert가 Vector의 원하는 부위에 삽입될 수 있도록 점착성 말단부위(Sticky end)를 만드는 것이 그 목적이다. 두 가지 제한효소를 처리할 경우 DNA의 잘려진 부위가 스스로 다시 붙는 현상. 즉 Self ligation의 가능성을 줄일 수 있다.
이번 실험 결과 모든 조의 결과에서 단일 Band를 확인 함 으로써 Vector가 제한효소에 의해 Linear form을 형성하였음을 확인하였다. 이와 함께 지난 실험에서 추출한 Uncut Vector의 전기영동 결과를 비교함으로 명확한 판정이 불가능 했던 Band의 형태가 Linear형태였음을 확인 할 수 있었다.

Introduction

제한효소(restriction enzyme)는 DNA 분자내의 특정한 염기서열을 인식하고, 인식한 서열 내 혹은 근처의 특정한 부위에서 double stranded DNA를 절단하는 균주 특이성이 있는 endonuclease이다. 이것은 세포내로 침입해 들어오는 virus나 외래의 DNA를 절단하여 제거하는 세균의 자기방어기구로 존재하는 것이다.
세균은 자신의DNA에는 인식절단 부위의 염기를 methylation시키기 때문에 자신의 제한효소 작용으로부터 자신을 보호한다.

-제한효소를 이용한 DNA 절단
제한효소를 이용하여 DNA를 절단하는 것은 분자생물학에 있어서 가장 기본적인 과정중의 하나이다.
DNA를 자른다는 것은 염기들이 서로 연결되어 있는 결합(phosphodiester 결합)을 끊어내는 것을 의미한다.

-제한효소의 종류 및 특성
제한효소는 크게 3가지 형태로 나누어진다.
① Type I enzyme

참고자료

· 없음