[생물 화학 공학] 염석에 의한 단백질 분획 예비레포트

최초 등록일
2002.05.19
최종 저작일
2002.05
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소개글

실험레포트 입니다. 주요 이론을 정리하여 넣었습니다.

목차

1. 실험제목 염석에 의한 protein분획
2. 실험목적
3. 실험원리
I. 단백질 분리 방법
① 염석
② 전기영동
전기영동의 종류
(1) SDS겔 전기영동법 [sodium dodecylsulfate polyacrilamide gel electric(SDS-PAGE)
(2) 등전점 전기영동(isoelectric focusing)
(3) 2차원 SDS-PAGE
2) 2차 전기영동
II. 계란속의 Protein
III. IgY항체 (계란항체)
4.실험방법

본문내용

3. 실험원리
I. 단백질 분리 방법
① 염석
단백질 등의 고분자 전해질의 용액에 다량의 염류를 가하여 용해도를 감소시켜 침전을
생기게 하는 방법을 염석(salting out)이라고 한다.
방법
염석법은 넓은 의미에서는 침전법에 속하나 배양물 중에서는 효소 등의 고분자
단백질이나 peptide류에 거의 한정되어 적용되고 있는 방법이다. 이외에 용해도를 저하시켜 침전시키는 방법과 유기용매를 첨가하여 응집 석출하는 방법도 자주 이용되나 이 방법은 효소의 변성, 실활을 일으키는 경우가 많다. 그러나 중성에서 용해도가 높은 무기염인 (NH4)2SO4, Na2SO4등을 첨가하여 단백질을 침전시키는 방법은 이러한 변성을 일으키지 않으므로 널리 이용된다. 또 첨가하는 무기염의 농도(포화도)를 단계적으로 조정함으로써 이종 단백질의 분별(fractionation)도 가능하다.염석은 물에 잘 용해하는 염을 단백질 혼합액에 가하여 단백질을 침전시키는 방법으로서 만약 목적으로 하는 단백질이 황산암모늄 60% 포화 이하의 황산암모늄 농도로 목적 이외의 단백질을 침전시켜 제거하고 다음에 60% 포화가 되도록 황산암모늄을 가하여 목적하는 단백질을 침전시켜 원심분리로 모은다. 염석은 정제의 초기 단계로 자주 사용되는 조작법이다.

참고 자료

1. Takehiko Y., Lekh R. J., Hajime H. and Mujo K., Hen Eggs Their Basic and Applied Science, CRC press, 1997
2. Leslie, G. A. and Clem, L. W., Phylogeny of immunoglobulin structure and function. III. Immunoglobulins of the chicken, J. Exp. Med., 130, 1337, 1969.
3. Leslie, G. A. and Martin, L. N., Studies on the secretory immunologic system of fowl. III. Serum and secretory IgA of the chicken. J. Immunol., 110, 1, 1973.
4. Rose, M. E., Orlans, E., Buttress, N., Immunoglobulin classes in the hen's egg: Their segregation in yolk and white, Eur. J. Immunol., 4, 521, 1974.
5. Jensenius, J. C., Anderson, I., Hau, J., Crone, M., and Koch, C., Eggs: Conveniently packsged antibodies. Methods for purification of yolk IgG, J. Immunol. Methods, 46, 63, 1981.

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