유세포 분석기를 통한 면역 분자 발현

소개

면역학 실습시간에 작성한 보고서로써
FACS를 사용한 실험입니다.

목차

1. Purpose
2. Meterial
3. Method
4. Result
5. Discussion
6. Reference

본문내용

IV. 면역세포 표면 분자 발현 조사 (유세포 분석)

1. Purpose : THP-1 (Monocytic cell line) 세포 표면에 발현하는 CD14 분자 발현을 유세포분석기 (Flow Cytometry, Flourescence-activated cell sorter (FACS))를 이용하여 분석한다.

2. Meterial : THP-1 Cell (Normal, CD14 Induced, Mixed) 1x PBS (Buffer), 1.5ml Tube, 15ml conical tube, pipette, tip, timer, Hemocytometer, PE-Conjugated isotype Antibody, PE-Conjugated anti-human CD14 Antibody, Centrifuge, Ice, 스티로폼 박스, FACS Tube, Flow cytometry

3. Method :
1) 배양중인 2종류의 THP-1 세포주를 15ml Tube로 10ml 옮긴 후 원심분리 한다 (상온 1250rpm 5min)
2) 상층액을 제거하고 1x PBS 10ml로 부유시킨 후 Hemocytometer를 이용하여 cell counting 하고 원심분리 한다.
3) 1.5ml Tube 6개를 준비하여 각각 Labeling한다.
4) 1x10^6 cell/ml이 되도록 1xPBS로 부유시킨 후 500ul씩을 덜어 1.5ml tube에 넣고 원심분리 한다.
5) 1.5ml Tube 2개를 준비하여 Label한 후 Label에 맞춰 각각의 항체를 12ul씩 넣고 1xPBS 150ul을 넣은 후 잘 섞어준다.
6) 상층액을 제거하고 Label에 맞춰 항체 혼합액 40ul씩을 처리하고 Pipetting하여 Cell을 잘 부유시킨 후 Ice에서 20분간 암상태로 반응시킨다.
7) 1xPBS 150ul을 첨가시킨 후 원심분리 한다.
8) 상층액을 제거한 후 1xPBS 200ul로 재부유 시킨 후 원심분리 한다.
9) FACS tube 6개에 각 조건을 Label하여 준비한다.
10) 원심분리 끝난 Tube에서 상층액을 제거한 후 1xPBS 400ul로 부유시킨 후 FACS tube로 옮긴 후 유세포분석기로 Reading하고 분석한다.

참고자료

· Naver Café : Café.naver.com/yaksonworld
· Naver Blog : Blog.naver.com/Kangd00
· Wikipedia : CD14, 항원항체반응
· Bric : Bric.Postech.ac.kr