미성숙난포란 채취 후 난구세포의 치밀도에 따른 등급 판정 실험

목차

실험 주제
실험 일시
실험 장소
실험 기구
실험의 흐름
실험 내용
실험 결과
고 찰

본문내용

실험 기구
실체현미경, Ovary, PBS medium, 비닐장갑, 10ml주사기,
18gauge주사바늘, 80mm petri-dish, 35mm petri-dish,
pipett
[※ PBS medium : PBS란 인산식염수 완충액으로 세포내에서 필요한 인산을 제공하 는 역할을 한다. Washing PBS는 난포를 pick-up하기 위해 난포액을 희석시키는 과정에서 사용되었다.]
실험의 흐름
Aspiration → pick-up → 등급 판정



이번 실험은 돼지의 자궁내 난소에서 난포액을 채취한 후, 난포액 내에 존재하는 미성숙 난포란을 현미경 하에서 pick-up하여 그에 따른 등급을 판정하는 실험을 하였다. 실험은 각 조별로 진행되었고 10ml주사기를 이용하여 미성숙 난포란을 채취하였다. 암퇘지의 자궁에서는 2개의 난소를 채취할 수 있다. 난소의 표면에 울통불퉁한 부분을 주사기로 흡입하면 난포액을 채취할 수 있으며 난포액 내에는 미성숙난포란이 존재한다. 한 손에는 비닐장갑을 착용하고 다른 한 손으로는 주사기를 잡고 ovary의 울퉁불퉁한 난포 표면의 튀어나온 부분에 주사바늘을 찔러 빨아들이는 방식으로 난포액과 난포란을 채취하였다. 제대로 빨아들이면 “뾱” 소리와 함께 주사기 안으로 미량의 난포액이 빨려 들어오게 된다. 한번 찌르는데 아주 적은양만 채취되기 때문에 여러 번 반복한 후 petri-dish에 옮기는 식으로 조원들과 함께 난포액을 채취하였다. 어느 정도 모인 난포액에서 미성숙난포란을 Pick-up하기 위해 washing PBS(인산식염수 완충액)로 난포액을 희석시켰다. 희석시킨 난포액을 재물대 위에 올려놓고 실체 현미경으로 적당한 배율을 맞춘 후 pipett을 이용하여 80mm petri-dish에 난자를 pick-up하였다. 35mm petri-dish로 난포란을 옮겨가며 순수한 미성숙 난포란만을 회수하였다. 난포란의 등급은 총 4등급으로 가장 최상의 품질을 A등급으로 구분(난구세포의 치밀도가 우수)하고, 약간의 이상이 있는 세포를 B등급(A등급보다 치밀도가 떨어짐), 난구세포가 거의 붙어있지 않은 세포를 C등급이라 하고, 난구세포의 치밀도가 가장 좋지 않은 세포를 D등급이라는 기준 하에 등급판정을 실시하였다.

◈난포란의 구조
① 핵: 반수체
② 난황(vitellus): 당, 단백, 지방소적, 인, RNA, 표층과립효소
(phosphatase, dehydrogenase, amylase),수정후 세포 수축
③ 난자세포막(oolema)=난황막(vitelline membrane):

참고자료

· 없음