Subculture manual.

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Subculture manual.

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준비
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본문내용

준비
1. 후드는 OFF상태일 때에도 전원, UV를 항상 켜놓습니다. FLOW버튼을 눌러놓은 후에 시작할까요. FLOW 기능이 어느 정도 작동한 후에 시작해야 컨템의 위험이 줄어들어요.
2. 손을 깨끗이 씻어주세요. 라텍스 장갑을 끼셔도 됩니다. 후드 바로 뒤 서랍에 있어요.
3. 커다란 냉장고 맨 밑 칸에 있는 try/EDTA, PBS, DME을 가져옵니다.
4. 후드 안에서 알코올램프로 try/EDTA, PBS, DME를 소독합니다. 먼저 병 상태로 주둥이를 소독하고, 뚜껑을 반쯤 연 상태에서 소독하고, 뚜껑을 연 후에 뚜껑과 병 주둥이를 소독합니다.
5. dish 2개를 꺼내어 놓습니다. 남은 dish는 비닐로 잘 밀봉해 놓으세요.
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5. 후드 뒤의 인큐베이터에서 cell을 가져옵니다. 두 칸 중에 윗 칸에 있어요. 이 때 인큐베이터 밑에 물이 떨어졌나 항상 확인하고 떨어졌으면 DW로 채워놓습니다. (조교님께 말씀하심 되요)
6. media를 파이펫으로 빨아냅니다.
-일회용 파이펫이 담긴 봉지의 비닐만 잡고 윗부분만 조금 뜯어주세요.
-파이펫 기구에 꼭 끼워줍니다. 헐거우면 media



10. 빨아올리는 과정을 시행합니다.
11. 이제 incubator에 넣고 5분 정도 incubation시켜준다.
-그 동안에 new dish에 미리 labeling을 해놓아요.(5조, split날짜, 293T)
-Media를 6ml 넣어줍니다.
12. 이제 incubator에 있던 dish를 꺼내와서 살짝 기울여서 cell이 둥둥 떠다니며 흘러내리나 확인해봅니다.
13. media를 10ml 넣은 후에 같은 파이펫으로 파이펫팅해서 잘 섞어줍니다. 이 때 파이펫이 바닥에 닿아도 상관 없어요.
14. 그 중 1ml를 새로운 dish에 넣어줍니다. 1:10의 비율이 되겠죠?
-두 개의 새로운 dish를 만들꺼니까 총 2ml를 따세요.
-새로운 dish에 넣을 땐 파이펫을

참고자료

· 없음