원핵생물과 진핵생물의 유전자를 전기영동으로 비교하는 실험 리포트

소개

원핵생물의 plasmid DNA와 진핵생물의 linear DNA를 전기영동하고 어떻게 다른지 알아보는 실험. 전기영동 시약 특성, 아가로즈 젤의 농도와 DNA 크기와의 관계, 전기영동 장치 조립, gel 제조 및 샘플 로딩, EtBr 염색법, 결과 분석 등에 대한 내용입니다.

목차

1. 실험목적
2. 원리 및 이론
1) DNA electrophoresis의 원리 및 agarose gel 농도에 따른 차이
2) pUC19 plasmid vector
3) Calf thymus DNA
4) EtBr (ethidium bromide) staining 원리
3. Reagent
4. Method
5. Result
6. Discussion

본문내용

1. 실험목적
전기영동방법의 원리를 이해하고 plasmid DNA와 Calf thymus DNA를 agarose gel에 전기영동 하여 결과를 비교한다.
2. 원리 및 이론
1) DNA electrophoresis의 원리 및 agarose gel 농도에 따른 차이
전기영동(electrophoresis)이란 하전된 입자가 전기장에서 양극 또는 음극 쪽으로 이동하는 현상을 말한다. 이때 이동하는 속도는 입자의 전하량, 크기와 모양, 용액의 pH와 점성도, 용액에 있는 다른 전해질의 농도와 전하량, 지지체의 종류 등 여러 가지 요인에 의해 결정된다. 따라서 어떤 용액과 지지체에서 하전된 입자의 이동속도는 분자 자체의 성질에 따라서 결정된다. 그러므로 전기이동법은 아미노산, 단백질, 핵산들과 같은 하전된 물질들을 분리하는 데 매우 효과적인 수단으로 이용된다.
Agarose gel electrophoresis는 DNA의 분리를 위해 널리 사용되는 간편한 방법이며, 겔상의 DNA를



5. Result
표 2의 시료를 0.8% agarose gel (분리가 가능한 DNA 길이의 유효범위: 0.7kb~9kb)에서 전기영동 하여 EtBr staining 후 UV상에서 본 이미지는 그림 4와 같다. Sample 1~3은 대장균의 pUC19 DNA이고, sample 4~6은 calf thymus DNA이다. Sample 7은 0.5kb에서 10kb까지 범위의 DNA ladder 이다.
6. Discussion
DNA를 전기영동 한 후 EtBr로 염색하면 EtBr이 DNA의 stacking base 사이로 빠르게 끼어들어가고 UV를 비추면 형광을 나타내므로 이 원리를 이용하여 전기영동을 한 DNA 밴드를 볼 수 있었다. 실험에
2.7kb pUC19 →
← 75kb Calf thymus DNA

참고자료

· 1. Joe Sambrook, Molecular Cloning (3rd Edition), Chapter 5, CSHL Press, 2001
· 2. 한국생화학회, 실험생화학, pp95-110, 탐구당, 2004
· 3. Jack J. Pasternak, An Introduction to Human Molecular Genetics (2nd Edition), pp512, Wiley, 2005
· 4. American Type Culture Collection (ATCC), http://www.atcc.org