생화학(SDS gel) 예비 레포트

소개

생화학(SDS gel) 예비 레포트

목차

1. SDS-PAGE gel의 기본 원리
2. Buffer의 조성
3. Buffer의 기능
4. Reference

본문내용

1. SDS-PAGE gel의 기본 원리
① SDS-PAGE(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis)

② Acrylamide를 cross-linker로 중합한 polyacrilamide gel은 acrylamide에 비해
gel내 미세통로의 크기 조절이 가능하여 다양한 크기의 분자를 분리하는데
용이하다. 뿐만 아니라 높은 정밀도 및 고 분해능으로 인해 protein, nucleicacid등을
분리하는데 널리 이용된다.
polyacrylamide의 중합 반응 메커니즘은 다음과 같다.



③ 생체 물질의 효과적인 분리 범위는 polyacrylamide의 농도와 가교제와의
중합정도에 따라 결정되며 이에 gel은 강도와 탄성을 유지하여 polypeptide가
통과할 작은 구멍을 형성한다. 이 구멍의 크기는 polyacrylamide의 비율이
증가할수록 감소하여 1:20 정도에서 가장 작게 된다. 대부분은 1:29 비율로
제조하여 사용하고 있으며 3% 분자량의 오차 범위에서 정확하게 polypeptide를
분리할 수 있다.

④ 단백질의 전기 영동법은 크게 두가지로 나뉘어 있는데, Continuous buffer
system과 Discontinuous buffer system이다. 연속 시스템은 pH 3~11사이의
buffer를 한가지 선택하여 gel과 전해질 농도를 동일하게 하는 것을 의미하고,
불연속 시스템은 stacking gel을 사용하는 것을 말한다. 일반적으로는 불연속
전기영동을 주로 사용하는데 그 이유는 많은 양의 시료를 loading하더라도
좋은 해상도를 얻을 수 있다는 점이다.

참고자료

· • Sambrook and Russel, Molecular Cloning : 3rd edition volume 3
· • wikipedia.org/SDS-PAGE