[생명과학]Plasmid DNA 분리

소개

Plasmid DNA 분리에 대한 예비 및 결과 레포트 입니다~

사진 첨부 및 결과 토의가 자세합니다~

좋은 참고 자료 되세요~ 평가도 부탁 드려요~^^

목차

1. Title
2. Date
3. Objective
4. Theory
5. Instrument & Reagent
6. Procedure
7. Reference
8. Result9. Discussion

본문내용

1. Title Plasmid DNA isolation
2. Date 2008. 11 .19
3. Objective
- 형질 전환된 E.Coli내에 있는 Plasmid DNA를 분리하고 Plasmid DNA에 대한 이해와 kit를 사용한 분리 정제법을 익힌다. E.Coli를 배양한 후, Plasmid DNA를 추출하고 Nano Drop(Spectrometer)으로 농도를 측정한다. (본 실험에서는 바이오니아사의 Plasmid Extraction Kit를 사용한다.)
4. Theory
- Plasmid DNA란 염색체 밖에 존재하는 DNA(extrachromosomal small circular DNA)이다. Plasmid DNA는 그 내부에 replication origin을 가지고 있어서 균주 내에서 염색체DNA 복제와 상관없이 독자적으로 복제된다. plasmid DNA를 소량 분리하는 방법으로 여러 가지 방법이 있지만, 그 중 가장 보편적으로 사용되는 방법은 주로 miniprep중 하나인 Alkali lysis method이다. 이 방법의 기본적인 원리는 세균의 세포벽(cell wall)과 세포막(cell membrane)을 부수고 DNA만을 분리하는 것이다.
이 때 중요한 것은 세균이 원래 가지고 있는 chromosomal DNA와 plasmid DNA를 구분하여 분리하는 것으로 이 둘은 모두 DNA이므로 성질이 비슷하기 때문에 구분하여 분리하는 것이 쉽지 않다. 그러나 다행히 chromosomal DNA는 분리 과정에서 linear 형태가 되고 크기가 상당히 크기 때문에 이런 성질의 차이를 이용하면 분리가 가능하다.
Alkali lysis method의 핵심 원리는 다음과 같다.
① 세포벽(cell wall)을 깬다.(이 때 세포막은 유지되도록 함) 세포벽을 군데군데 무너뜨리는 물질은 EDTA이며, 이때 sucrose나 glucose가 첨가되어 세포의 형태를 유지하도록 하게 한다. 때로는 lysozyme을 쓰기도 한다.

참고자료

· - http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_workshop/DNA_purification.php
· - http://biochemistry.yonsei.ac.kr/biochem_molecular/gene_cloning_20.php
· - http://www.babel5.org/babel5/courseMatrix.action?cid=4(Plasmid DNA isolation)